[发明专利]一种尿液中近端肾小管来源exosome含量的检测方法

摘要

本发明公开了一种尿液中近端肾小管来源exosome含量的检测方法，包括以下步骤：S1，制备尿液exosome悬液；S2，测定尿液exosome悬液中蛋白浓度；S3，分选尿液exosome悬液中近端肾小管来源exosome；S4，对S3中分选出的尿液中近端肾小管来源的exosome进行检测。本发明采用超速离心方法获得高纯度的尿液exosome，再采用免疫磁珠吸附exosome，克服了exosome体积小的问题，增加了流式细胞仪方法检测exosome的可行性；采用CD63和CD13免疫标记方法分选尿液中近端小管来源的exosome，并用于后续对尿液中近端肾小管来源exosome含量进行准确检测分析。

主权项

1.一种尿液中近端肾小管来源exosome含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，制备尿液exosome悬液S2，测定尿液exosome悬液中蛋白浓度往S1的尿液exosome悬液中加入等体积的RIPA裂解液，混匀后得到exosome裂解液；测定exosome裂解液中蛋白浓度；S3，分选尿液exosome悬液中近端肾小管来源exosome往CD63包被的磁珠中加入分选缓冲液，混匀后置于磁场环境中，弃上清，得到预处理磁珠；根据S2测得的尿液exosome悬液中蛋白浓度，取含有已知蛋白含量的尿液exosome悬液，加入预处理磁珠，并加入分选缓冲液，在2‑8℃下混匀，然后再加入分选缓冲液，置于磁场环境中，弃上清，得到沉淀A，往沉淀A中加入分选缓冲液重悬，得到重悬液；往重悬液中加入PE标记的CD63抗体和APC标记的CD13抗体，孵育45‑60min，再加入分选缓冲液，混匀后置于磁场环境中，弃上清，得到沉淀B，沉淀B用分选缓冲液清洗后弃上清，得到沉淀C；往沉淀C中加入pH为7.4的磷酸盐缓冲液重悬，即得到尿液中近端肾小管来源的exosome；S4，检测尿液中近端肾小管来源exosome的含量采用流式细胞仪对S3中分选出的尿液中近端肾小管来源的exosome进行检测。