[发明专利]利用内源性CRISPR系统对乳酸片球菌进行基因编辑的方法有效
| 申请号： | 201910728089.6 | 申请日： | 2019-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN110452922B | 公开（公告）日： | 2021-03-26 |
| 发明（设计）人： | 彭楠;刘玲;杨丹露;张志雨;梁运祥 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/90;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京盛询知识产权代理有限公司 11901 | 代理人： | 陈巍 |
| 地址： | 430000 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种乳酸片球菌基因编辑质粒，其构建方法包括：将含有两个DNA重复序列和两个三型酶切位点Bbs1的mini‑CRISPR序列克隆至穿梭质粒pMG36E并转化至大肠杆菌中，获取转化子，再经活化、抽提得到乳酸片球菌基因编辑质粒pMG36E‑C。还公开了利用内源性CRISPR系统对乳酸片球菌进行基因敲除、插入及点突变的方法，不需要克隆外源CRISPR核酸酶基因，通过基因编辑质粒可高效快速的对乳酸片球菌进行基因组编辑，编辑效率可达90％，利于应用及推广；完成编辑的菌株只需2‑3次传代即可完成带抗性的敲除质粒消除，利于多个基因连续编辑，改变营养代谢途径或者插入新代谢途径，以达到定向改造。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 内源 crispr 系统 乳酸 球菌 进行 基因 编辑 方法 | ||
【主权项】：
1.一种乳酸片球菌基因编辑质粒，其特征在于，所述基因编辑质粒的构建方法包括以下步骤：/n将含有两个DNA重复序列和两个三型酶切位点Bbs1的mini-CRISPR序列、乳酸片球菌的穿梭质粒pMG36E分别进行酶切，再将酶切产物酶连后转化至大肠杆菌中，经筛选，获取转入pMG36E-C的转化子；/n活化所述转入pMG36E-C的转化子，抽提质粒得到乳酸片球菌基因编辑质粒pMG36E-C；/n其中，所述DNA序列如SEQ ID NO：1所示。/n
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