[发明专利]一种口腔黏膜上皮细胞的分离和培养方法在审
| 申请号： | 201910735940.8 | 申请日： | 2019-08-09 |
| 公开（公告）号： | CN110317777A | 公开（公告）日： | 2019-10-11 |
| 发明（设计）人： | 秦晓东;何祥一;曾飒;张志东 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京棘龙知识产权代理有限公司 11740 | 代理人： | 戴丽伟 |
| 地址： | 甘肃省兰州*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种口腔黏膜上皮细胞的分离和培养方法，具体涉及细胞培养技术领域，具体分离和培养步骤如下：无菌条件下取唇裂整复术中切除的多余口腔黏膜组织，用PBS反复冲洗，用眼科剪除去黏膜下组织，剪成小块，置于DispaseⅡ酶中，4℃过夜消化18h，用眼科镊分离上皮层，PBS液冲洗上皮层，将上皮剪切成小片加入混合消化液中，37℃消化7分钟，加胎牛血清终止消化，用吸管反复吹打至单细胞悬液，离心弃上清，加入无血清培养基，接种于培养瓶中倒置培养，当原代培养的细胞汇合率达70％‑80％时，用0.25％胰蛋白酶/0.02％EDTA消化并以1:2传代。本发明整个培养过程简单，得到的原代培养细胞成活率高，并且不易出现双核、多核、畸形核细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 消化 口腔黏膜 上皮细胞 上皮层 胰蛋白酶 传代 唇裂 吸管 口腔黏膜组织 无血清培养基 细胞培养技术 原代培养细胞 单细胞悬液 倒置培养 胎牛血清 无菌条件 细胞汇合 原代培养 剪切 吹打 核细胞 培养瓶 消化液 眼科剪 眼科镊 多核 双核 小块 成活率 冲洗 接种 切除 畸形 | ||
【主权项】：
1.一种口腔黏膜上皮细胞的分离，其特征在于，具体分离步骤如下：S101、在无菌条件下，取唇裂整复术中切除的多余口腔黏膜组织，将其放入烧杯容器内，然后使用50ml含1％双抗的PBS反复冲洗5遍，去除口腔黏膜组织表面的污垢和杂质；S102、用眼科剪除去冲洗后的黏膜下组织，然后将剩余的黏膜上组织剪成2mm×1mm的小块，然后置于盛有2.5g/LDispaseⅡ酶的容器中，过夜消化；S103、将步骤S102中过夜消化的黏膜组织用眼科镊分离上皮层，再用含1％双抗的PBS液冲洗上皮层，将口腔黏膜组织上皮层剪切成小片，然后再加入盛有混合消化液的容器中进行消化；S104、向步骤S103的容器中加胎牛血清终止消化，再用吸管反复吹打至单细胞悬液；S105、将单细胞悬液取出，将其倒入离心机内，对溶液进行离心，得到离心基液。
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