[发明专利]人体液中抗NMDAR自身抗体的检测材料、制备方法及应用在审
| 申请号： | 201910738488.0 | 申请日： | 2019-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN110606887A | 公开（公告）日： | 2019-12-24 |
| 发明（设计）人： | 闫亚平;李怡婷;郝文斌;李科 | 申请（专利权）人： | 陕西脉元生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/705 | 分类号： | C07K14/705;C07K1/14;C12N15/861;G01N33/531;G01N33/564 |
| 代理公司： | 61216 西安恒泰知识产权代理事务所 | 代理人： | 李婷;金艳婷 |
| 地址： | 710003 陕西省西安*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了人体液中抗NMDAR自身抗体的检测材料、制备方法及应用，本发明将NMDAR抗原包被于载体膜上制成抗NMDAR受体检测材料，人血清和脑脊液中的特异性NMDAR抗体会与抗原结合，利用碱性磷酸酶底物‑配体反应进行显色，并在显色反应中加入本发明的封闭材料，可用通过肉眼观察直接判断检测样品中是否含有NMDAR抗体。该方法具有灵敏度高，操作简便，快速检测等优点，有助于抗NMDAR受体脑炎的识别和诊断。 | ||
| 搜索关键词： | 碱性磷酸酶底物 封闭材料 检测材料 检测样品 抗原包被 抗原结合 快速检测 受体检测 显色反应 自身抗体 脑炎 灵敏度 脑脊液 人体液 人血清 载体膜 抗体 可用 配体 显色 制备 诊断 应用 | ||
【主权项】：
1.人体液中抗NMDAR自身抗体的检测材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1，获取NMDAR的CDS序列作为目的基因，将带有酶切位点的目的基因插入pShuttle-cmv质粒载体中，得到重组质粒载体pAdEasy-NMDAR1α；/n步骤2：将重组质粒载体pAdEasy-NMDAR1α转染入293T细胞中，得到腺病毒pAdEasy-NMDAR1α-293T细胞；/n步骤3：裂解pAdEasy-NMDAR1α-293T细胞，去除pAdEasy-NMDAR1α-293T细胞的核蛋白、DNA和胞浆蛋白，再加入复合提取液，4℃静置15～30min后在35～40℃水浴，直至出现分层；/n其中，复合提取液为Triton X100、CHAPS、N-甲基葡糖胺按照体积比为1:1:1的比例混合或洋地黄皂苷、Triton X100、NP40、CHAPS按照体积比1:1～2：1～2：1的比例混合；/n步骤4：取分层后的沉淀，向沉淀中加入溶剂混匀，去除上清液，将所得沉淀固化在载体膜上，得到人体液中抗NMDAR自身抗体的检测材料；/n其中，溶剂为10％PEG的无水乙醇溶液、10％PEG的丙酮溶液或10％PEG的异丙酮溶液。/n
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