[发明专利]一种获得橙色花椰菜小孢子DH再生植株的方法

摘要

本发明公开了一种获得橙色花椰菜小孢子DH再生植株的方法，将橙色花椰菜种质资源与普通白色花椰菜材料杂交的F₁代作为供体材料，选择处于双核早期的花蕾，分离小孢子，培养游离小孢子至子叶胚状体形成，将子叶胚状体插入胚状体分化培养基中，至胚状体膨大并再生出新植株，再生植株插于生根培养基中进行培养，将生根后的再生植株移入基质中，成活后进行小孢子再生植株倍性检测和花球鉴别，获得橙色花椰菜小孢子双单倍体DH(doubled haploid)再生植株。本发明方法获得纯合的橙色花椰菜小孢子DH再生植株，小孢子培养出胚率最高可达35个胚/蕾，胚状体的萌发率平均达45％。

主权项

1.一种获得橙色花椰菜小孢子DH再生植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)供体植株与花蕾的选择将橙色花椰菜种质资源与小孢子培养胚胎发生好的普通白色花椰菜材料杂交，将其F₁代作为供体材料，选择处于双核早期的花蕾；2)花蕾小孢子的分离将花蕾灭菌处理后，加入胚状体诱导培养基，制成悬浮液，过滤收集滤液，离心弃上清液，加入活性炭混合液混配成小孢子悬浮液；3)小孢子胚状体的培养将小孢子悬浮液置于恒温培养箱中暗培养至胚状体出现后，振荡培养至子叶形胚状体形成；4)再生植株的分化与萌发将子叶形胚状体插入胚状体分化培养基中，至胚状体膨大并再生出新植株；5)再生植株的生根培养与移栽切取萌发有正常生长点的再生植株插于生根培养基中，进行生根培养，将生根后的再生植株移入基质中，覆盖薄膜保湿培养；6)再生植株的倍性检测取移栽成活再生植株的嫩叶，用倍性分析仪检测该再生植株的染色体DNA倍性。