[发明专利]一种外泌体冻干粉及其制备方法和包含该外泌体冻干粉的制剂

摘要

本发明公开了一种外泌体冻干粉及其制备方法以及包含该外泌体冻干粉的制剂，该外泌体冻干粉的制备方法包括以下步骤：富血小板因子血浆的制备：采取自体血液，离心制得，外泌体制备；自取自体脂肪，制得脂肪间充质干细胞，对间充质干细胞进行培养，制得；冻干液制备：将富血小板因子血浆、和外泌体混匀，向其中加入海藻糖，混匀，制得；冷冻干燥：将冻干液进行冷冻干燥，制得。该制剂包括外泌体冻干粉、玻尿酸和生理盐水，该制剂可有效解决现有的美容制剂存在填充效果差，维持时间短以及免疫排斥反应大的问题。

主权项

1.一种外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)富血小板因子血浆的制备：采取自体血液，于800～2000g/min条件下离心6～12min，然后吸取中间部分，将其于‑40～‑80℃条件下冻存3～8h，取出冻融后于2000～4000rpm/min条件下离心6～10min，去除底部固体碎片，得富血小板因子血浆；(2)外泌体的制备：吸取自体脂肪，制得脂肪间充质干细胞，对脂肪间充质干细胞进行培养，待细胞融合度长至75～85％时，用生理盐水对细胞清洗，然后将细胞转入无血清培养基中培养20～30h后，收集细胞培养上清液，将其于2～6℃，800～1200g离心力条件下离心10～20min，弃去沉淀，再对其进行超滤浓缩，收集浓缩液，将浓缩液于2～6℃，80000～120000g离心力条件下离心1～4h，收集沉淀，得外泌体；(3)冻干液的制备：向步骤(2)中制得的外泌体中加入生理盐水和海藻糖重悬，再进行孵育，得混合液，向混合液中加入步骤(1)制得的富血小板因子血浆，富血小板因子血浆和混合液的体积比为1～3:1～3，混匀，得冻干液；其中，混合液中海藻糖物质的量浓度为40～70mM，外泌体中白蛋白质量浓度为200～500ug/ml；(4)冷冻干燥：将冻干液于35～40℃条件下平衡20～50min，然后在‑60～‑80℃条件下预速冻8～14h，再在‑30～‑60℃，5～15Pa条件下冷冻干燥20～48h，制得。