[发明专利]一种肠毒素基因LT敲除的大肠杆菌及其构建方法有效
| 申请号： | 201910746510.6 | 申请日： | 2019-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN110551668B | 公开（公告）日： | 2021-11-05 |
| 发明（设计）人： | 邓盾;马现永;吕晓慧;檀克勤 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院动物科学研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/90;C12N15/31;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 颜希文;宋静娜 |
| 地址： | 510000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种肠毒素基因LT敲除的大肠杆菌的构建方法，包括如下步骤：1)构建LT基因同源重组供体LT donar，LT donar的碱基序列依次包括L‑arm、cat promoter、CmR、sgCommon、PAM、L‑short、R‑arm多核苷酸片段；以及2)制备含pCas‑Red质粒的感受态细胞，加入步骤1)的LT donar进行转化，然后筛选阳性克隆，即得无痕敲除了热不稳定肠毒素基因LT的大肠杆菌。本发明将Crispr/Cas9与λ‑Red同源重组系统结合，成功地对产肠毒大肠杆菌K88的LT基因进行无痕敲除，突变菌株丧失溶血能力，减缓生长；利用本发明的方法可快速、便捷的对产肠毒大肠杆菌K88基因进行无痕敲除，为研究LT功能提供了坚实的研究基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 毒素 基因 lt 大肠杆菌 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种肠毒素基因LT敲除的大肠杆菌，所述大肠杆菌相比野生型，无痕敲除了热不稳定肠毒素基因LT。/n
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