[发明专利]利用液相色谱串联质谱测定蜂蜜中意蜂MRJP1蛋白含量的方法在审
| 申请号： | 201910750312.7 | 申请日： | 2019-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN110596262A | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 杨术鹏;李熠;丛晓蕾;周金慧;张金震;金玥 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院蜜蜂研究所 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/86;G01N33/68 |
| 代理公司： | 11002 北京路浩知识产权代理有限公司 | 代理人： | 黄爽 |
| 地址： | 100093*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种利用液相色谱串联质谱测定蜂蜜中意蜂MRJP1蛋白(王浆主蛋白1)含量的方法，所述方法包括：特征肽段的选择，制作标准曲线，样品前处理，液相色谱分离以及串联质谱检测定量等步骤。本发明提供的蜂蜜中意蜂MRJP1含量的检测方法，具有特异性强、灵敏度高、准确度和精确度好等优点，适合于蜂蜜中意蜂MRJP1的准确定量。由于蜂蜜中MRJP1的含量相对恒定，基于其含量可用于蜂蜜真实性评价，辅助鉴别蜂蜜是否掺假。此外，中蜂蜂蜜中不含有意蜂MRJP1，因此可以用于中蜂蜂蜜中是否混入意蜂的鉴别。该方法对于维护蜂蜜消费行业健康发展和蜂蜜消费者的权益意义重大。 | ||
| 搜索关键词： | 蜂蜜 意蜂 液相色谱串联质谱 液相色谱分离 恒定 样品前处理 准确度 标准曲线 串联质谱 辅助鉴别 特异性强 准确定量 灵敏度 主蛋白 检测 混入 可用 肽段 真实性 蛋白 鉴别 制作 健康 维护 | ||
【主权项】：
1.利用液相色谱串联质谱测定蜂蜜中意蜂MRJP1蛋白含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nA、提取标准意蜂蜂蜜样品中的蛋白质，进行SDS-PAGE电泳，将MRJP1蛋白对应的条带切胶回收，然后酶解MRJP1蛋白，酶解产物除盐后，用0.1％v/v的甲酸水溶液复溶，然后进行液相色谱串联质谱检测；/nB、根据液相色谱串联质谱检测结果，筛选出MRJP1蛋白的特征肽段并测序，然后人工合成所述特征肽段及其稳定同位素内标肽段；/nC、配制不同浓度的所述特征肽段的标准品溶液；/nD、向标准品溶液中加入稳定同位素内标肽段混匀，然后进行液相色谱串联质谱检测；/nE、根据标准品溶液的浓度以及特征肽段/稳定同位素内标肽段的峰面积比绘制标准曲线；/nF、对待测蜂蜜样品进行前处理：先将蜂蜜样品溶解于水或PBS缓冲溶液中，利用超滤法提取蜂蜜中的蛋白质；将蛋白溶液用胰蛋白酶水解，酶解产物除盐后作为待测样本；/nG、用待测样本替代步骤D中的标准品溶液，采用相同方法进行液相色谱串联质谱检测；/nH、根据待测样本的检测结果，对照标准曲线，获得待测样本中特征肽段的浓度，从而实现对蜂蜜样品中意蜂MRJP1蛋白的定量检测；/n其中，所述特征肽段为：FFDYDFGSDER。/n
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