[发明专利]一种PVMV侵染性全长cDNA克隆的构建方法有效
| 申请号： | 201910756897.3 | 申请日： | 2019-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN110423762B | 公开（公告）日： | 2021-05-11 |
| 发明（设计）人： | 崔红光;胡巍耀;秦丽;杨柯 | 申请（专利权）人： | 海南大学 |
| 主分类号： | C12N15/40 | 分类号： | C12N15/40;C12N15/82;C12N1/21;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 张立娜 |
| 地址： | 570228 海南省海口*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种PVMV侵染性全长cDNA克隆的构建方法。本发明方法包括如下：利用密码子的简并性，将甜椒脉斑驳病毒的基因组RNA对应的全长cDNA序列的第2363位的A替换为C，得SEQ ID No.1；根据SEQ ID No.1中存在的两个单一限制性内切酶AatII和BamH I的识别位点，将SEQ ID No.1分成三段；制备得到三个片段并将其克隆到同一个植物表达载体中，得到含有SEQ ID No.1的重组表达载体即为甜椒脉斑驳病毒侵染性全长cDNA克隆。利用该方法能以低成本，快速高效地构建出PVMV侵染性克隆，本发明为日后防治相关病害提供理论依据。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 pvmv 侵染 全长 cdna 克隆 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种构建甜椒脉斑驳病毒侵染性全长cDNA克隆的方法，包括如下步骤：(A1)利用密码子的简并性，将甜椒脉斑驳病毒的基因组RNA对应的全长cDNA序列的第2363位的A替换为C，得到改造后甜椒脉斑驳病毒的基因组RNA对应的全长cDNA序列；所述改造后甜椒脉斑驳病毒的基因组RNA对应的全长cDNA序列如SEQ ID No.1所示；(A2)根据SEQ ID No.1中存在的两个单一限制性内切酶AatII和BamH I的识别位点，将SEQ ID No.1分成三段，分别记为N段、M段和C段；(A3)制备所述N段、所述M段和所述C段，然后将三个片段克隆到同一个植物表达载体中，得到重组表达载体；在所述重组表达载体中，所述N段、所述M段和所述C段无缝连接为SEQ ID No.1；所述重组表达载体即为甜椒脉斑驳病毒侵染性全长cDNA克隆。
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