[发明专利]一种用于非洲猪瘟病毒核酸快速检测的Cpf1试剂盒及其检测方法有效
| 申请号： | 201910762824.5 | 申请日： | 2019-08-19 |
| 公开（公告）号： | CN110551846B | 公开（公告）日： | 2021-10-08 |
| 发明（设计）人： | 王鑫杰;黄行许;李广磊 | 申请（专利权）人： | 上海科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海申汇专利代理有限公司 31001 | 代理人： | 翁若莹 |
| 地址： | 201210 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于非洲猪瘟病毒核酸快速检测的Cpf1试剂盒，包括适用于非洲猪瘟病毒快速检测的Cpf1检测体系与免疫胶体金试纸条；所述Cpf1检测体系包括：针对非洲猪瘟病毒p72基因的特异性crRNA、Cpf1蛋白和单链DNA(ssDNA)报告系统；所述特异性crRNA为ASFV P72 crRNA1到ASFV P72 crRNA10中的任意一种或多种，其序列为SEQ NO.4到SEQ NO.13；所述单链DNA(ssDNA)报告系统包括用于酶标仪荧光检测的ssDNA FQ reporter和/或用于免疫胶体金试纸条检测的ssDNA DB reporter。本发明系首次采用Cpf1检测非洲猪瘟病毒，具有灵敏度高、特异性强、耗时短、高通量、不依赖大型实验设备等优势。这些优势使得本发明开发的基于Cpf1胶体金试纸检测方法方便用于基层实验室和养殖企业对非洲猪瘟的基层快速检测检测和鉴定诊断。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 非洲 猪瘟 病毒 核酸 快速 检测 cpf1 试剂盒 及其 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用于非洲猪瘟病毒核酸快速检测的Cpf1试剂盒，其特征在于，包括适用于非洲猪瘟病毒快速检测的Cpf1检测体系与免疫胶体金试纸条；所述Cpf1检测体系包括：针对非洲猪瘟病毒P72基因的特异性crRNA、Cpf1蛋白和ssDNA报告系统；所述特异性crRNA为ASFVP72 crRNA1到ASFV P72 crRNA10中的任意一种或多种，其序列为SEQ NO.4到SEQ NO.13；所述ssDNA报告系统包括用于酶标仪荧光检测的ssDNA FQ reporter和/或用于免疫胶体金试纸条检测的ssDNA DB reporter；其中，所述ssDNA FQ reporter为利用6-羧基荧光素和荧光淬灭剂标记的ssDNA，标记产物如下：/5 6FAM/TTTATTT/3BHQ1/，命名为ssDNA FQreporter/5 6FAM/TTTATTT/3BHQ1/；所述ssDNA DB reporter为利用地高辛和生物素标记的ssDNA,标记产物如下：/5Dig/TTTATTT/3Bio/，命名为ssDNA DB reporter/5Dig/TTTATTT/3Bio/；所述免疫胶体金试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC背衬；PVC背衬上依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述的结合垫上包被有被胶体金标记鼠抗地高辛抗体的缀合物；所述的硝酸纤维素膜上分别包被有链霉亲和素构成的质控线和由兔抗鼠IgG抗体构成的检测线。/n
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