[发明专利]一种稻白色绿核菌的分离方法及其人工接种液的制备方法在审
| 申请号： | 201910765432.4 | 申请日： | 2019-08-19 |
| 公开（公告）号： | CN110408550A | 公开（公告）日： | 2019-11-05 |
| 发明（设计）人： | 缪建锟;董海;徐晗;杨皓;闫晗;褚晋;刘晓舟;孙柏欣;白元俊;杨眉;李志强;刘兴远;赵杨;王丽娟;贾姝;辛晓通;齐国峰 | 申请（专利权）人： | 辽宁省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645 |
| 代理公司： | 郑州欧凯专利代理事务所(普通合伙) 41166 | 代理人： | 李宣宣 |
| 地址： | 110161 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种稻白色绿核菌的分离方法及其人工接种液的制备方法，解决的问题是北方病样分离成功率低、样品厚垣孢子抖落法分离的菌株不能确定是否为单孢菌株、病样伴有大量寄生性腐生性的杂菌、目标菌生长缓慢，分离困难等。本发明包括以下步骤：（1）稻白色绿核菌样品选择：选取重新采集的样品，保存时间不超过9个月；重新采集的稻白色绿核菌样品为新鲜白色、黄色或相近颜色；（2）制备厚垣孢子悬浮液；（3）将步骤（2）制得的厚垣孢子悬浮液的稀释：（4）将步骤（3）稀释后的厚垣孢子悬浮液的进行涂布：（5）涂布后分离稻白色绿核菌。本发明快3天即可分离得到纯化目标单孢菌株、7天即可制备好人工接种液。对田间刚采集的稻白色绿核菌的分离效果最好，有很好的应用推广前景。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 厚垣孢子悬浮液 人工接种 单孢菌株 采集 稀释 病样 种稻 纯化目标 分离效果 厚垣孢子 生长缓慢 相近颜色 样品选择 寄生性 目标菌 抖落 菌株 杂菌 成功率 田间 保存 新鲜 北方 应用 | ||
【主权项】：
1.一种稻白色绿核菌的分离方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)稻白色绿核菌样品选择：选取重新采集的样品，保存时间不超过9个月；(2)制备厚垣孢子悬浮液；(3)将步骤(2)制得的厚垣孢子悬浮液的稀释：在1.5ml的Eppendorf管中采用将厚垣孢子悬浮液母液和无菌水按照1:10比例进行10×梯度稀释，共稀释2～3个梯度；(4)将步骤(3)稀释后的厚垣孢子悬浮液的进行涂布：(5)涂布后分离稻白色绿核菌：从涂布完成后的第12h开始显微镜或者体视镜镜检，每6h镜检一次，发现已经开始萌发的单孢，用无菌接种针挑取，轻放到PSA固体培养基表面，将培养皿放入28℃恒温箱中黑暗培养，第3天通过镜检即可看到分离成功的目标病菌的单孢菌落。
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