[发明专利]从万年蒿中提取分离木脂素类化合物的方法

摘要

本发明涉及从万年蒿中提取分离木脂素类化合物的方法，所述木脂素类化合物包括：(+)‑表松脂素、落叶松脂醇‑4′‑O‑β‑D‑葡萄糖苷、落叶松脂醇‑4‑O‑β‑D‑葡萄糖苷；提取分离方法为：采用硅胶、ODS开放柱和半制备液相色谱等多种色谱方法，对万年蒿的95％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分进行分离纯化，首次分离得到上述3个化合物。该提取方法简单，提取效率高，提取的化合物数量多，为木脂素类化合物的药理性研究奠定基础，同时丰富了万年蒿药材的化学成分，进一步阐明了该药材的药效物质基础。

主权项

1.从万年蒿中提取分离木脂素类化合物的方法，其特征在于，所述木脂素类化合物包括：(+)‑表松脂素、落叶松脂醇‑4′‑O‑β‑D‑葡萄糖苷、落叶松脂醇‑4‑O‑β‑D‑葡萄糖苷；提取分离方法包括以下步骤：步骤S1、取干燥万年蒿地上部分，粉碎后依次用6‑8倍量的95％乙醇回流提取2‑4次，每次1‑2h，合并提取液，提取液减压浓缩得浸膏；步骤S2、取浸膏加适量水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，回收溶剂后分别得到石油醚部分，乙酸乙酯部分；步骤S3、取乙酸乙酯部分进行硅胶柱色谱分离，用石油醚‑乙酸乙酯(1:0→4:1)梯度洗脱，每个梯度所用洗脱溶剂为20L，收集洗脱液，每10L洗脱液为1个部分，分别减压浓缩，得到4个部分，即Fr.1～Fr.4；其中，所述硅胶柱内径为10cm；步骤S4、将步骤S3获得的Fr.4用适量甲醇溶解后进样，经ODS柱色谱分离，用甲醇‑水(5:5→6:4→7:3→8:2)梯度洗脱，每个梯度所用洗脱溶剂为10L，分别收集洗脱液，减压浓缩得4个亚组分，即Fr.4‑1～Fr.4‑4；步骤S5、将步骤S4获得的Fr.4‑2用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得(+)‑表松脂素；色谱条件为：Eclipse XDB‑C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相36％MeOH/H₂O，流速3ml/min；步骤S6、将步骤S4获得的Fr.4‑3用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得落叶松脂醇‑4′‑O‑β‑D‑葡萄糖苷粗品；色谱条件为：Eclipse XDB‑C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相36％MeOH/H₂O，流速3ml/min；之后取落叶松脂醇‑4′‑O‑β‑D‑葡萄糖苷粗品用适量甲醇溶解后进行二次HPLC制备，进一步分离纯化得落叶松脂醇‑4′‑O‑β‑D‑葡萄糖苷；色谱条件为：Eclipse XDB‑C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相28％ACN/H₂O，流速3ml/min；步骤S7、将步骤S4获得的Fr.4‑4用适量甲醇溶解后经半制备型HPLC分离纯化得落叶松脂醇‑4‑O‑β‑D‑葡萄糖苷粗品；色谱条件为：Eclipse XDB‑C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相36％MeOH/H₂O，流速3ml/min；之后取落叶松脂醇‑4‑O‑β‑D‑葡萄糖苷粗品用适量甲醇溶解后进行二次HPLC制备，进一步分离纯化得落叶松脂醇‑4‑O‑β‑D‑葡萄糖苷；色谱条件为：Eclipse XDB‑C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm，柱温30℃，流动相28％ACN/H₂O，流速3ml/min。