[发明专利]一种掌叶防己碱用于治疗急性肺损伤的实验方法

摘要

本发明公开了一种掌叶防己碱用于治疗急性肺损伤的实验方法，包括以下步骤：S1、选择40只品系为ICR的SPF级雄鼠，小鼠的年龄为6‑8周，然后将40只小鼠分为四组每组10只，分别是：A：空白对照组(No treatment，NT)；B：单加PA组(Pa)；C：ALI模型组(LPS)；D：ALI模型组+PA治疗组(LPS+Pa)；S2、提前将50μg的LPS溶解于20μL的PBS溶液中，小鼠经过乙醚麻醉后，通过鼻内给药的方式建立ALI模型。该掌叶防己碱用于治疗急性肺损伤的实验方法，通过体内外实验分别检测了RAW264.7细胞和小鼠肺脏组织的促炎介质表达和分泌水平，利用分子生物学技术全面评估了掌叶防己碱对急性肺损伤的治疗效果，掌叶防己碱能够有效的减少细胞和肺脏组织中促炎介质的表达和分泌，从而缓解急性肺损伤。

主权项

1.一种掌叶防己碱用于治疗急性肺损伤的实验方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、选择40只品系为ICR的SPF级雄鼠，小鼠的年龄为6‑8周，然后将40只小鼠分为四组每组10只，分别是：A：空白对照组(No treatment，NT)；B：单加Pa组(Pa)；C：ALI模型组(LPS)；D：ALI模型组+Pa治疗组(LPS+Pa)；S2、提前将50μg的LPS溶解于20μL的PBS溶液中，小鼠经过乙醚麻醉后，通过鼻内给药的方式建立ALI模型；S3、在构建ALI模型的前6天以口服灌胃的方式进行给药，给药浓度为100mg/kg，给药体积为100μL；S4、将小鼠经过LPS处理12h后，取出5只小鼠的完整左叶肺脏制成5份样本，获取小鼠肺脏并拍照片，用干净的滤纸仔细将其表面的液体蘸干净，然后记录肺脏组织的重量，获得湿重；然后将其储存在恒温干燥器中，在80℃下保持48h，获得干重，计算湿重/干重(w/d)比，评价肺的含水量；S5、使用S4中的5只小鼠取出右叶肺脏，将每只小鼠的右叶肺脏均切成两块，然后将5只小鼠的右叶肺脏制成5份相同的石蜡切片；S6、取出部分右叶肺脏用于肺脏髓过氧化物酶(MPO)的测定；S7、小鼠经过LPS处理12h后，取剩下5只小鼠的支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid，BALF)，在转速为12000r/min的条件下离心5min，然后取上清液转移至新的1.5mL离心管中，应用酶联免疫吸附实验检测炎性细胞因子TNFα、IL‑6；S8、CCK8实验在96孔板中均匀接种细胞，当细胞生长至底壁面积的70％时，用不同药物浓度的掌叶防己碱处理细胞5h，5h后每孔加入10μL的CCK8，在37℃细胞培养箱中继续放置1h，然后测定450nm处的吸光度；S9、RAW264.7细胞产生炎性基因的检测实验将细胞接种到60cm²的细胞培养皿中，含2mL培养基，待细胞密度长至底壁面积的70％时，加入LPS使其工作浓度为1μg/mL，利用LPS刺激细胞4h，在加入LPS前1h加入100μM的Pa，5h后提取总RNA，反转录进行荧光定量实验，检测Pa对RAW264.7细胞炎性基因TNF‑α和IL‑6的表达所产生的影响。