[发明专利]一种黄檗组织培养方法

摘要

本发明涉及一种黄檗组织培养方法，本发明的黄檗的组织培养方法选择乙醇‑纳米银溶液消毒是由于纳米银离子具有促进胚胎细胞形成和生长作用，且利用破坏菌体后自然迁徙到培养基中形成二次消毒能力的特性，诱导启动培养基和增殖培养基中添加TBHQ起到抗褐变的作用，本发明的方法外植体经过预处理两次催芽获得低污染材料，同时诱导启动培养基和增殖培养基采用特定的原料制成，可以减少外植体的褐变；本发明的方法可以在短时间内快速获得大量的黄檗优良品种苗木，本发明以黄檗带芽茎段为外植体，经过外植体催芽、芽诱导、芽增殖培养、生根培养、练苗及移栽实现了黄檗的离体再生，为其大量选育、快速繁殖新品种推广起到了技术支持。

主权项

1.一种黄檗组织培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)首先分别配制诱导启动培养基、增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基并调节pH值，加热溶解后注入玻璃瓶中，在110‑120℃高压消毒13‑17min后凝固备用；(2)选择3‑4月未萌发优良野生或驯化单株的腋芽茎段为外植体，依次经过乙醇‑纳米银溶液消毒和升汞消毒，用无菌水冲洗4‑5次，放入无菌条件下催芽备用；(3)将步骤(2)催芽备用的新枝条剪切成带有隐芽长度为1cm的茎段，接种在装有所述的诱导启动培养基的玻璃瓶中，依次进行低温培养，升温，在光照下培养28‑32天，在茎段隐芽处分化长成单芽苗；(4)将所述的单芽苗剪切成带有隐芽的小段，放入装有所述的增殖培养基的玻璃瓶中，进行增殖培养至4.0‑4.4倍时，得到试管芽苗；(5)将所述的试管芽苗剪去基部愈伤组织，接种在装有所述的壮苗培养基的玻璃瓶中，进行壮苗培养30‑35天，得到试管壮苗；(6)将所述的试管壮苗剪去基部愈伤组织和部分叶片，保留3‑5片叶片，接种在装有所述的生根培养基的玻璃瓶中，进行生根培养10‑15天，得到具有完整根的小苗；(7)将所述的具有完整根的小苗取出清洗，移栽到基质中，喷施多菌灵后浇透水，控制温度和湿度，20天后生根成活。