[发明专利]一种高水溶性牡蛎锌螯合肽的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种高水溶性的牡蛎锌螯合肽的制备方法及其应用，以牡蛎肉为原料，经过步骤：制备牡蛎冻干粉、提取牡蛎蛋白、碱性蛋白酶酶解、3KDa超滤离心、C18为填料的SPE柱纯化及真空冷冻干燥，获得高水溶性牡蛎锌螯合肽。本发明的制备方法简单、安全，制备的高水性牡蛎锌螯合肽为天然可食用成分，具有较高的锌离子结合能力和高水溶性，具有良好的溶解度，易于吸收，可作为一种锌补充剂，具备实际开发的应用前景。

主权项

1.一种高水溶性牡蛎锌螯合肽的制备方法，其特征在于，包括步骤：S1、制备牡蛎冻干粉：取牡蛎肉洗净，真空冷冻干燥，得牡蛎冻干粉；S2、提取牡蛎蛋白：将步骤S1所述牡蛎冻干粉与水按重量比1:3～1:5混合，使用碱性调节剂调节pH至12～13，在1000～2000rpm搅拌2～3h，10000～12000rpm离心15～20min，取上清液；调节所述上清液的pH至4.8～5.1，静置1～2h，10000～12000rpm离心15～20min，取沉淀；将所述沉淀进行真空冷冻干燥，得牡蛎蛋白粉；其中，所述碱性调节剂为NaOH溶液、碳酸氢钠溶液或碳酸氢钾溶液；S3、酶解：取步骤S2所述牡蛎蛋白粉溶于水，按照蛋白粉中的蛋白质含量占所述牡蛎蛋白粉重量的80％计算，配制成蛋白浓度为10～20mg/ml的牡蛎蛋白溶液；向所述牡蛎蛋白溶液中加入碱性蛋白酶，使用碱性调节剂调节pH至9～10，在45～55℃、1000～2000rpm搅拌4～5h，加热灭酶，得到牡蛎蛋白酶解液；以所述牡蛎蛋白溶液中的蛋白总量计，每毫克蛋白添加碱性蛋白酶4～6U；其中，所述碱性调节剂为NaOH溶液、碳酸氢钠溶液或碳酸氢钾溶液；S4、过滤：使用分子量3kDa的超滤离心管，将步骤S3所述牡蛎蛋白酶解液3500～4000rpm离心30～60min，取所述超滤离心管下层的滤过液，真空冷冻干燥，得分子量在3000kDa以下的初始牡蛎锌螯合肽；S5、纯化：取步骤S4所述初始牡蛎锌螯合肽溶于水，配置成浓度为1～5mg/ml的初始牡蛎锌螯合肽溶液，经滤膜过滤后采用C18为填料的SPE柱进行分离纯化，收集洗脱剂洗脱得到的溶液，即为含有高水溶性牡蛎锌螯合肽的溶液；其中，所述滤膜为0.22μm或0.45μm，所述洗脱剂为去离子水或体积分数0.1％甲酸水溶液；S6、干燥：对步骤S5所述高水溶性牡蛎锌螯合肽溶液进行氮吹干燥，得到高水溶性牡蛎锌螯合肽。