[发明专利]一种检测细菌16S rDNA全长的建库测序方法有效
| 申请号： | 201910790501.7 | 申请日： | 2019-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN110452974B | 公开（公告）日： | 2022-09-16 |
| 发明（设计）人： | 冯涛;马伟志;王震 | 申请（专利权）人： | 北京群峰纳源健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;C12Q1/04;C40B50/06;G16B30/10 |
| 代理公司： | 北京栈桥知识产权代理事务所(普通合伙) 11670 | 代理人： | 潘卫锋 |
| 地址： | 102209 北京市昌平区北七*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测细菌16S rDNA全长的建库测序方法，通过在每个样品上加上分子标签UMI，分别扩增得到连接文库和拼接文库，对两个文库进行测序，通过识别UMI组合的方式提取数据，并组装出16S rDNA全长序列，进而比对数据库确定菌种种类。本发明的建库方法适合所有类型样本的菌群结构检测，能够将传统的菌群结构鉴定从“属”级别提升到“种”级别，与属水平相比较，种水平的优势，可以更准确的确定环境微生物的生态结构，便于深入研究，由此可对样本进行特定细菌菌种的检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 细菌 16 rdna 全长 建库测序 方法 | ||
【主权项】：
1.一种检测细菌16S rDNA全长的建库测序方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)定量提取样本中菌群的总DNA，标记为样本A；/n(2)以步骤(1)样本A的DNA为模板，通过两端带有特异分子标签UMI的引物组PCR扩增16S rDNA全长，并为每一个原始扩增的16S rDNA全长加上特异的分子标签UMI，得到扩增产物；/n(3)将步骤(2)所得扩增产物用Tn5酶片段化并构建测序用拼接文库，并标记为A-P；/n(4)将步骤(2)所得扩增产物的环化连接并构建测序用连接文库，并标记为A-L；/n(5)将所述拼接文库A-P和连接文库A-L测序，得到拼接文库A-P和连接文库A-L的测序结果；/n(6)将步骤(5)的测序结果进行生物信息技术处理分析，通过识别UMI组合的方式，在拼接文库A-P和连接文库A-L中提取数据，并组装出16S rDNA全长序列，进而比对数据库确定菌种种类。/n
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