[发明专利]区域干细胞诱导活性去细胞骨腱界面书页支架

摘要

本发明属于骨腱界面损伤修复技术领域，具体涉及区域干细胞诱导活性去细胞骨腱界面书页支架，具体包括：步骤一、hBMP‑2、hTGF‑β3及hGDF‑7的获取，配制成100ng/ml的hBMP‑2、hTGF‑β3及hGDF‑7的工作液；步骤二、制备hBMP‑2、hTGF‑β3及hGDF‑7缓释初乳；步骤三、双重仿生去细胞骨腱界面书页支架的制备；步骤四、区域性定向诱导缓释型去细胞骨腱界面书页支架的制备；步骤五、区域干细胞诱导活性去细胞骨腱界面书页支架的制备；为临床骨腱界面重建提供一种形态天然、力学可靠、活性优良的新型组织工程移植物，从而实现骨腱界面损伤后快速而优质的愈合。

主权项

1.区域干细胞诱导活性去细胞骨腱界面书页支架，其特征在于，所述支架具体制备步骤为：/n步骤一、成骨生物活性因子、成软骨生物活性因子及成肌腱生物活性因子的获取；/n具体为：获取hBMP-2、hTGF-β3及hGDF-7，配制成100ng/ml的hBMP-2、hTGF-β3及hGDF-7的工作液；/n步骤二、制备hBMP-2、hTGF-β3及hGDF-7缓释初乳；/n步骤三、双重仿生去细胞骨腱界面书页支架的制备；/n步骤四、区域性定向诱导缓释型去细胞骨腱界面书页支架的制备：/n冻干的去细胞双重仿生骨腱界面书页支架，无菌环境下分开书页后，在肌腱端使用夹具分开夹住每一页书页，首先将支架-纤维软骨区域浸入含有100ng/ml hTGF-β3-PLGA初乳液中2小时；取出后，将支架-骨区域浸入含有100ng/ml hBMP-2-PLGA初乳液中2小时；取出后，将支架-肌腱区域浸入含有100ng/ml hGDF-7-PLGA初乳液中2小时；获得缓释型区域干细胞定向诱导活性去细胞骨腱界面书页支架；/n步骤五、区域干细胞诱导活性去细胞骨腱界面书页支架的制备：/n(1)、脂肪间充质干细胞片的制备：将第3-4代脂肪间充质干细胞以每平方厘米4×10⁵的细胞密度种植于培皿，在37℃、5％CO₂饱和湿度培养箱内进行培养，每隔2-3天常规换液，待脂肪间充质干细胞增殖融合到95％左右，将培养皿置于20℃、5％CO₂环境下培养20-30min，待干细胞片层脱落形成间充质干细胞片；/n(2)、区域干细胞诱导活性新型书页组织工程支架复合间充质干细胞片：区域干细胞定向诱导活性去细胞骨腱界面书页支架在接种干细胞片前先用钴60消毒后，再用干细胞培养液浸泡2h，将脂肪间充质干细胞片种植于区域干细胞定向诱导活性去细胞骨腱界面书页支架的各层，完成区域干细胞诱导活性去细胞骨腱界面书页支架的制备。/n