[发明专利]一种快速高效提取百合花瓣总RNA的方法

摘要

本发明公开了一种快速高效提取百合花瓣总RNA的方法，涉及RNA提取技术领域。本发明公布的技术方案不仅可提高RNA的得率，且采用裂解液中的CTAB和高浓度的NaCl协同作用，使部分多糖随着抽提过程而逐渐去除，其次利用LiCl可以选择沉淀总RNA，使部分多糖留在溶液中而不随RNA沉淀下来，可极大地降低了沉淀中多糖的含量，在此基础上进一步引入了磁珠法除多糖步骤，使用上述几种去多糖的步骤，可以有效地去除百合花瓣组织中的多糖干扰，提取出较为理想的总RNA。本发明解决了常见方法对含有多糖类物质的植物提取RNA时，在除去多糖的同时RNA也被裹携带走，造成RNA产量的减少，或者多糖溶解后形成粘稠的溶液污染RNA样品，难以进一步研究的问题。

主权项

1.一种快速高效提取百合花瓣总RNA的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：/n(1)百合花瓣的裂解、总RNA的抽提：取百合花瓣组织块研磨，得研磨料，于裂解液中加入研磨料混合均匀，于65℃水浴，室温离心，加入等体积异丙醇混匀，于-20℃静置，再于4℃离心，弃上清，收集离心物加入200ul焦碳酸二乙酯(DEPC)溶解，得样本RNA液；/n(2)RNA的洗涤、纯化：于样本RNA液中加入等体积的沉淀剂混匀后，于-20℃静置，再于4℃，离心，弃上清，瞬离后将液体完全吸出，静置晾干，加入溶剂溶解其中的RNA，于-80℃保存，得纯化RNA液，取纯化RNA液于4℃离心，弃上清后，使用溶剂进行溶解后加入等体积的沉淀剂去除溶液中的多糖组分，加入辅助除多糖剂，震荡混匀后加入磁珠，移液吹吸混匀，室温静置，漂洗，待磁珠室温晾干，加入溶剂溶解RNA，于-80℃保存，得待测RNA液；/n(3)琼脂糖凝胶电泳：采用琼脂糖凝胶、电泳缓冲液，与待测RNA液进行电泳，完成后取出琼脂糖凝胶，在紫外灯下观察，采用凝胶成像系统拍照保存；/n(4)系统检测：仪器系统检测提取总RNA的浓度及完整性。/n