[发明专利]一种适合环境类样本和粪便类样本的宏蛋白提取方法

摘要

本发明公开了一种适合环境类样本和粪便类样本的宏蛋白提取方法，属于蛋白提取领域。本发明通过优化蛋白提取的全流程，包括使用高通量组织研磨仪对样本进行湿磨、通过自行配制的提取液对样本进行蛋白提取、样品湿磨后置于冰上裂解等过程，建立了一种适合环境类样本和粪便类样本的宏蛋白提取方法，可以成功提取绝大部分的环境类样本和粪便类样本，提取的蛋白质得率更高，纯度更好，条带更清晰丰富，对于后续质谱鉴定具有显著的优势。本发明解决了目前对自然环境中采集的样品由于含有许多干扰物质，蛋白质提取困难，且处理步骤会造成蛋白的进一步损失的问题。

主权项

1.一种适合环境类样本和粪便类样本的宏蛋白提取方法，其特征在于，该提取方法包括如下步骤：(1)配制提取缓冲液；(2)称取样品按质量比1：3比例加入步骤(1)所配制的提取缓冲液混合，进行三次研磨过程，得复研磨料；(3)将复研磨料置于冰上，裂解，得裂解料；(4)取步骤(3)所得裂解料冷冻离心，收集上清；(5)取上清加入酚，涡旋振荡，振荡期间间歇放于冰上保持，得处理液；(6)取处理液冷冻离心，得酚相；(7)取酚相与酚相等体积提取缓冲液混合，涡旋振荡，振荡期间间歇放于冰上保持；(8)取经步骤(7)处理的酚相冷冻离心，获得二次处理酚相；(9)取二次处理酚相按1：4的体积比加入沉淀剂，冷藏，得含有沉淀蛋白的混合液；(10)取步骤(9)所得混合液冷冻离心，弃上清，收集离心物A；(11)取离心物A按1：4的体积比加入清洗液，涡旋分散，得分散液；(12)取分散液冷冻离心，弃上清，收集离心物B；(13)连续重复步骤(11)、(12)两次，收集沉淀风干，得干燥物；(14)取干燥物按1：5的比例加入蛋白裂解液，涡旋震荡溶解，得溶解物；(15)取溶解物超声波处理，冰上裂解，得复裂解料；(16)取复裂解料冷冻离心，取上清保存，即得该样本的宏蛋白。