[发明专利]一种复方山楂中绿原酸和橙皮苷含量测定及综合评价方法

摘要

本发明公开了一种复方山楂中绿原酸和橙皮苷含量测定及综合评价方法，具体涉及保健食品成分效果研究领域，包括复方山楂水提物与醇提物的制备、对照品及供试品溶液的制备、干膏率计算、有效成分含量测定、实验对象样品的配制、急性毒性实验、小肠运动实验、大鼠体重、体重增重、摄食量和食物利用率的测定、大鼠胃蛋白酶的测定和数据统计分析。本发明建立了复方山楂中绿原酸和橙皮苷的含量测定方法，并对比了复方山楂水提物和醇提物的有效成分含量和促消化效果，采用高效液相色谱法测定复方山楂水提物和醇提物中绿原酸和橙皮苷的含量，并进行综合评分，复方山楂水提物有效成分含量和促消化效果优于醇提物。

主权项

1.一种复方山楂中绿原酸和橙皮苷含量测定及综合评价方法，其特征在于：其中测定的步骤：S1、复方山楂水提物与醇提物的制备，具体包括：S1.1、水提物的制备：称取陈皮饮片，用水蒸气蒸馏提取法提取挥发油，药渣再和山楂混匀加10倍量水回流提取90分钟，提取2次，合并三次药液，减压浓缩后定容；S1.2、醇提物的制备：称取陈皮饮片，采用水蒸气蒸馏提取法提取挥发油，药渣再和山楂加10倍量70％乙醇回流提取90分钟，提取2次，合并三次药液，离心得上清液，减压浓缩后定容；S2、对照品及供试品溶液的制备：分别精密称取一定量的绿原酸对照品和橙皮苷对照品置同一25ml容量瓶中，用甲醇溶解制成含绿原酸0.1207mg/ml，橙皮苷0.1017mg/ml的溶液作为绿原酸和橙皮苷混合对照品溶液，取复方山楂水提物和醇提物定容后的溶液作为供试品溶液，对照品及供试品均用0.22μm微孔滤膜过滤；S3、干膏率计算：分别精密吸取提取液10ml，置于蒸发皿中水浴蒸干，转移至105℃烘箱中干燥3h，取出至干燥器中冷却后精密称定重量W，计算干膏率：S4、有效成分含量测定：在设定色谱条件分别对水提物和醇提物供试品进样6μl测定峰面积，根据线性回归方程计算复方山楂水提物和醇提物中绿原酸和橙皮苷的含量；S5、实验对象样品的配制，具体包括：S5.1、阳性药物：将健胃消食片用研钵研磨成细粉，用水制成0.133g/ml的混悬液；S5.2、模型药物：去掉洛哌丁胺胶囊的胶囊壳，其粉末用水溶解，造模剂量为5mg/kg；S5.3、墨汁：称取阿拉伯胶10g，加水80ml，煮沸至溶液透明，称取活性炭粉末10g加至上述溶液中煮沸3次，室温冷却后定容至100ml，置于4℃冰箱中保存，临用前摇匀；S5.4、复方山楂水提取物和醇提物溶液配制：将S1.1项定容后的提取物减压浓缩至含生药量1.35g/ml，将提取所得的挥发油加至浓缩后的药液中，同时向药液中加入相当于药液总体积2％的吐温80，混合均匀置于4℃冰箱中保存，临用前用含2％吐温80的水溶液稀释至给药浓度；S6、急性毒性实验：分别取昆明小鼠40只、SD大鼠40只，雌雄各半，小鼠、大鼠均按性别随机分为2组，每组雌雄各10只，适应性喂养3天后开始急性毒性实验，小鼠灌胃给予108g/kg(按生药量计)的水提物和醇提物，大鼠灌胃给予45g/kg的水提物和醇提物，所有动物给药后观察一周，每天定时称其体重并观察动物状态；S7、小肠运动实验：取雄性小鼠100只，按体重分为10个组，分别为空白组、模型组、阳性组、吐温组、水提物低中高剂量组及醇提物低中高剂量组，水提物和醇提物低中高剂量分别为(按生药量计)2.7g/kg、13.5g/kg、27g/kg，连续灌胃15天，每天定时灌胃一次，空白组和模型组给予蒸馏水，吐温组给予2％吐温，实验结束当天，给药组给予一次药物，空白及模型组给予一次蒸馏水，吐温组给予一次吐温，三十分钟后，给药组、模型组和吐温组给予洛哌丁胺造模，空白组给予同体积蒸馏水，三十分钟后，每组均给予墨汁，25分钟后处死动物，迅速打开腹腔分离肠系膜，剪取自幽门至回盲部的小肠，置于白纸上，分别测量小肠全长和从幽门到墨汁前沿的距离，计算墨汁推进率和墨汁推进率转换值；推进率转换值：P：小鼠小肠推进率；S8、大鼠体重、体重增重、摄食量和食物利用率的测定：取雄性SD大鼠，分为空白组、阳性组、吐温组、水提物低中高三个剂量组及醇提物低中高三个剂量组，每组10只，水提物和醇提物低中高剂量分别为0.95g/kg、1.89g/kg、9.45g/kg(按生药量计)，空白组给予蒸馏水，阳性组给予2g/kg的健胃消食片，吐温组给予含2％吐温80的蒸馏水，所有动物连续灌胃30d，每天定时灌胃一次，每周记录两次大鼠体重和食物摄取量，并根据体重变化调整给药量，实验结束时计算体重增重、摄食量和食物利用率；食物利用率＝体重增加量/摄食量×100％；S9、大鼠胃蛋白酶的测定，具体包括：S9.1、蛋白管的制备：用毛细玻璃管吸满新鲜鸡蛋清，然后在热水中使鸡蛋清凝固，即得蛋白管；S9.2、胃蛋白酶活性及排出量的测定：按S8项方法分组及给药，实验结束时用戊巴比妥钠麻醉大鼠，结扎大鼠幽门收集3h胃液并测定其体积，将收集的胃液按每1ml加入15ml盐酸置于离心管中混匀，加入新鲜制备好的蛋白管2根，密封，37℃恒温孵育24h后取出，用游标卡尺测量每根蛋白管两端透明部分的长度，求出四端的平均值，根据胃蛋白酶活性单位公式计算胃蛋白酶活性，根据胃蛋白酶排出量公式计算胃蛋白酶排出量；胃蛋白酶活性单位(U·ml^‑1)＝四端蛋白管透明部分长度均值²×16胃蛋白酶排出量(U·h^‑1)＝胃蛋白酶活性×胃液量/h；S10、数据统计分析:实验所得数据以均数±标准差表示，数据采用Graphpad prism 5.0软件统计分析，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，以p<0.05为具有统计学意义。