[发明专利]采用RT-qPCR技术检测杯状病毒的方法在审
| 申请号： | 201910801455.6 | 申请日： | 2019-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN110468236A | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 钱学敏;巩丽;苏财忠;童涌 | 申请（专利权）人： | 苏州药明检测检验有限责任公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 31211 上海浦一知识产权代理有限公司 | 代理人： | 郑权<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 215104 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开一种采用RT‑qPCR技术检测杯状病毒的方法，包括步骤：1)提取待测样品总RNA；2)制备反应体系，包括一步法预混液、上下游引物、探针；3)梯度稀释标准曲线样品；4)试剂的阴性对照、待测样品的阴性对照以及加入了标准品的待测样品上样；5)RT‑qPCR反应；6)结果分析。本发明提供的RT‑qPCR方法适用于生物生产过程中检测有关的细胞或原液是否被Calicivirus感染，该方法简单高效、结果稳定，重复性好。本发明的方法可缩短检测所用时间，而且有操作相对简单、检测的特异性重复性好等优点，适合于生物生产过程中繁复的检测要求。 | ||
| 搜索关键词： | 待测样品 检测 生物生产 阴性对照 杯状病毒 标准曲线 技术检测 结果分析 梯度稀释 标准品 一步法 预混液 总RNA 上样 探针 引物 原液 制备 细胞 感染 | ||
【主权项】：
1.一种采用RT-qPCR技术检测杯状病毒的方法，其特征在于，包括步骤：/n1)提取待测样品总RNA，并将RNA模板的浓度调整为0.1μg/μL；/n2)制备反应体系，包括一步法预混液、引物和探针；/n所述一步法预混液为Taqman Fast Virus 1-Step Master Mix；/n上下游引物为：正向引物FP，核苷酸序列为：GGGACTCAATCCAGTTTCGT，和反向引物RP，核苷酸序列为：TTCATGATCAAGGCCAGTGT；/n所述探针为Probe：CTCATTTGCCTGGCGGACCA；/n3)梯度稀释标准曲线样品；/n4)试剂的阴性对照、待测样品的阴性对照以及加入了标准品的待测样品上样；/n5)RT-qPCR反应；/n6)结果分析。/n
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