[发明专利]通过优化编码基因在大肠杆菌里表达病原体蛋白HIV-GP41的制备方法在审
| 申请号： | 201910806075.1 | 申请日： | 2019-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN110423763A | 公开（公告）日： | 2019-11-08 |
| 发明（设计）人： | 许琴;苏妙贤;谢志伟;严俊 | 申请（专利权）人： | 苏州新格诺康生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/49 | 分类号： | C12N15/49;C12N15/70;C07K14/16;C07K1/16 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市工业*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种通过优化编码基因在大肠杆菌里表达病原体蛋白HIV‑GP41的制备方法，通过优化编码基因在大肠杆菌里表达病原体蛋白HIV‑GP41制备方法的步骤：先将合成优化的DNA序列并克隆到pET22B载体中，再通过在BL21菌株中利用IPTG诱导表达目标蛋白，将过夜培养的细菌接种到2XYT培养基中，在37度，摇床速度为220rpm的条件下培养到OD＝0.6；再加入0.5mM IPTG，在20度，摇床速度为220rpm的条件下诱导表达4小时；收集诱导后的菌体，利用分子筛柱层析的方法从中纯化出目标蛋白，通过本发明提出的制备方法，使之与大肠杆菌的偏好使用的编码基因一致，便于该类病原体蛋白在大肠杆菌中的表达生产。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 病原体蛋白 编码基因 制备 目标蛋白 优化 摇床 分子筛柱层析 细菌接种 诱导表达 培养基 菌体 偏好 诱导 克隆 合成 生产 | ||
【主权项】：
1.一种通过优化编码基因在大肠杆菌里表达病原体蛋白HIV‑GP41的制备方法，其特征在于：所述通过优化编码基因在大肠杆菌里表达病原体蛋白HIV‑GP41制备方法的步骤包括：第一步：合成优化的DNA序列并克隆到pET22B载体中；第二步：在BL21菌株中利用IPTG诱导表达目标蛋白，过夜培养的细菌以1：100的比率接种到2XYT培养基中，在37度,摇床速度为220rpm的条件下培养到OD＝0.6；加入0.5mM IPTG后，在20度,摇床速度为220rpm的条件下，诱导表达4小时；第三步：收集诱导后的菌体，利用分子筛柱层析的方法从中纯化出目标蛋白。
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