[发明专利]羊膜组织工程去免疫原皮肤支架的制备方法

摘要

本发明公开一种羊膜组织工程去免疫原皮肤支架的制备方法，对羊膜进行漂洗消毒，然后浸泡于商品化羊膜细胞培养基中，于37℃的CO2培养箱内培养，72h后将培养的羊膜从培养基中取出，培养后的培养液经离心及0.22um滤膜过滤后分装，于‑80℃冰箱冻存；取出的羊膜用乙醇进行连续梯度脱水3d，无菌风干，按临床需求截成不同规格羊膜贴片，无菌真空包装后备用。本发明所采用的方法能够实现简便、快速、高效、大规模制备医用人工皮肤的目的，且使用的材料为人或猪羊膜，来源广泛，多为生产后的废弃物，成本较低且不存在伦理问题。本发明目前已分别在大鼠及猪(大动物模型)上进行烧伤后皮肤再生验证，效果显著且未见不良免疫反应。

主权项

1.一种羊膜组织工程去免疫原皮肤支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取无病毒和细菌感染的胎盘，在无菌条件下从胎盘内层剥下羊膜，放置到无菌生理盐水中，反复冲洗除去羊膜表面的血迹，并用镊子自羊膜与绒毛膜间的潜在空隙钝性剥离羊膜，用无菌PBS冲洗，上述取材均在无菌条件下完成；2)将剥离后的羊膜用生理盐水清洗，随后置于含抗生素的生理盐水中浸泡消毒；3)将消毒后的羊膜置于商品化羊膜细胞培养基中，于37℃的CO₂培养箱中培养制备羊膜贴片复性营养液，3天后过滤，分装后置于‑80℃保存备用；4)取出羊膜，经生理盐水清洗后用不同浓度乙醇‑生理盐水梯度脱水3天，最后于75％乙醇中浸泡1‑24h；5)将脱水后的羊膜置于无菌超净工作台内风干；6)按需求裁剪成不同规格羊膜贴片，进行无菌真空包装，阴凉干燥，室温保存备用。