[发明专利]一种叶酸代谢相关基因多态性的检测方法在审
申请号: | 201910832258.0 | 申请日: | 2019-09-04 |
公开(公告)号: | CN110468184A | 公开(公告)日: | 2019-11-19 |
发明(设计)人: | 赵方圆;李晓娇;智慧芳;倪君君 | 申请(专利权)人: | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6858 | 分类号: | C12Q1/6858 |
代理公司: | 37100 济南信达专利事务所有限公司 | 代理人: | 程佩玉<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
地址: | 101111 北京市北京经济技术开发区经*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明提供了一种叶酸代谢相关基因多态性的检测方法,包括:提取受试者的基因组DNA;配置单碱基延伸反应体系和聚合酶链式反应PCR扩增体系;顺次进行扩增反应;顺次进行消化处理;顺次混合消化处理后的体系和单碱基延伸反应体系,进行延伸反应,并进行纯化;利用液相色谱‑质谱联用仪检测纯化处理后的产物,确定基因组DNA特定SNP位点的基因型;其中,洗脱流动相为含1%~5%(v/v)六氟异丙醇和0.05%~0.3%(v/v)三乙胺的蒸馏水,以及含1%~5%(v/v)六氟异丙醇和0.05%~0.3%(v/v)三乙胺的甲醇,洗脱方式为梯度洗脱。本方案能够灵敏、简便的对目标基因的SNP位点进行基因分型。 | ||
搜索关键词: | 单碱基延伸反应 六氟异丙醇 基因组DNA 消化处理 三乙胺 蒸馏水 聚合酶链式反应 洗脱流动相 质谱联用仪 纯化处理 基因分型 扩增反应 目标基因 梯度洗脱 洗脱方式 相关基因 延伸反应 叶酸代谢 液相色谱 多态性 基因型 检测 甲醇 灵敏 配置 | ||
【主权项】:
1.一种叶酸代谢相关基因多态性的检测方法,其特征在于,包括:/n提取受试者的基因组DNA;/n配置包含SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.3所示的单碱基延伸引物序列的单碱基延伸反应体系,并配置包含SEQ ID NO.4~SEQ ID NO.9所示的特异性扩增引物序列和所述基因组DNA的聚合酶链式反应PCR扩增体系;/n顺次对所述PCR扩增体系进行扩增反应;/n顺次对扩增反应后的体系进行消化处理;/n顺次混合消化处理后的体系和所述单碱基延伸反应体系,获得混合液,并对所述混合液进行延伸反应;/n顺次对延伸反应后的体系进行纯化处理;/n利用液相色谱-质谱联用仪检测纯化处理后的产物,确定所述基因组DNA特定SNP位点的基因型;/n其中,所述液相色谱-质谱联用仪的洗脱流动相为含1%~5%(v/v)六氟异丙醇和0.05%~0.3%(v/v)三乙胺的蒸馏水,以及含1%~5%(v/v)六氟异丙醇和0.05%~0.3%(v/v)三乙胺的甲醇,洗脱方式为梯度洗脱。/n
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