[发明专利]一种负载斑蝥素的肿瘤细胞膜包封碲单质纳米颗粒的制备方法

摘要

本发明提出一种负载斑蝥素的肿瘤细胞膜包封碲单质纳米颗粒的制备方法，属于纳米生物医药领域。所述的纳米颗粒以碲单质为核心、斑蝥素为模型药物、肿瘤细胞膜做为外层包衣。纳米颗粒中的肿瘤细胞膜将对机体有毒副作用的碲纳米材料和斑蝥素包封在内，提高纳米颗粒的生物相容并有效避免免疫细胞的清除，具有同源靶向的能力；在静脉注射后，纳米颗粒会通过EPR效应和同源靶向性大量聚集在肿瘤部位，碲单质在近红外刺激下迅速升温，导致外层细胞膜破裂，外泄的斑蝥素抑制肿瘤细胞的热休克反应，增强碲单质光热治疗效果，杀伤肿瘤细胞。本发明方法设计合理，制备工艺简单，具有广阔的应用前景，为相应给药系统的设计和发展打下基础。

主权项

1.一种负载斑蝥素的肿瘤细胞膜包封碲单质纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：/n第一步，合成碲单质纳米颗粒/n1.1)将亚碲酸钠完全溶解于去离子水中，并加入氨水调节反应体系PH，得到亚碲酸钠的混合溶液；室温下，持续搅拌亚碲酸钠的混合溶液；再向亚碲酸钠的混合溶液中分别加入聚乙烯吡咯烷酮和还原剂谷胱甘肽，得到混合液A，并向反应体系中充入氮气；继续搅拌混合液A，搅拌时间不低于10min；/n所述亚碲酸钠的质量与去离子水体积的比为1g:(100～150)mL；亚碲酸钠与聚乙烯吡咯烷酮的质量比为1:(1～3)；亚碲酸钠与谷胱甘肽的质量比为1:(0.05～0.15)；/n1.2)将步骤1.1)得到的混合液A移至80-100℃油浴中，反应10-30min后得到红褐色液体；将红褐色液体依次用丙酮、去离子水清洗，再经冷冻干燥后得到碲单质纳米颗粒；/n第二步，分离肿瘤细胞膜/n2.1)收集肿瘤细胞，采用磷酸缓冲盐溶液清洗；/n2.2)将步骤2.1)得到的肿瘤细胞用高渗裂解液重悬，在4℃下静置，得到细胞悬液；/n2.3)将步骤2.2)得到的细胞悬液在4℃、400-600g下离心，分离出上清液；/n2.4)将步骤2.3)中经离心、分离后的上清液在4℃、10000-15000g下离心，分离出上清液；/n2.5)将步骤2.4)中经离心、分离后的上清液在4℃、100000-150000g下离心；倒掉上清液，得到的沉淀A即纯净的肿瘤细胞膜；/n第三步，合成负载斑蝥素的肿瘤细胞膜/n3.1)将步骤2.5)得到的肿瘤细胞膜用丙酮溶解，斑蝥素也用丙酮溶解，将肿瘤细胞膜的丙酮溶液和斑蝥素的丙酮溶液混合，得到肿瘤细胞膜和斑蝥素的混合液体；所述的肿瘤细胞膜和斑蝥素的浓度比为1：(0.02-0.05)；/n3.2)将步骤3.1)得到的肿瘤细胞膜和斑蝥素的混合液体逐滴加入10-15ml去离子水中，并持续搅拌得到混合液B；将混合液B放置在旋转蒸发仪上旋蒸10-15min；待混合液B不再产生气泡时，将混合液B在4℃、100000-150000g下离心，分离得到的沉淀B即负载斑蝥素的肿瘤细胞膜；/n第四步，合成负载斑蝥素的肿瘤细胞膜包封碲单质纳米颗粒/n4.1)将步骤3.2)得到的沉淀B用磷酸缓冲盐溶液重悬，然后将悬液通过400nm聚碳酸酯膜反复挤出，再通过200nm聚碳酸酯膜反复挤出，得到负载斑蝥素的肿瘤细胞膜；/n4.2)将4.1)中得到的负载斑蝥素的肿瘤细胞膜和步骤1.2)得到的碲单质纳米颗粒通过200nm聚碳酸酯膜共同挤出，得到负载斑蝥素的肿瘤细胞膜包封碲单质纳米颗粒；所述的负载斑蝥素的肿瘤细胞膜和碲单质纳米颗粒的质量比为1:(0.5-1)。/n