[发明专利]一种人脐带间充质干细胞制备方法

摘要

本发明公开了一种人脐带间充质干细胞制备方法，属于干细胞制备领域。本发明的制备方法包括采集、分离、换液、传代、冻存、检测、程序降温及储存全过程。以人脐带为材料提取脐带间充质干细胞，采用两种酶两步消化法进行制备，利用消化下来的细胞和消化结束剩余的组织分开培养后传代混合一起培养，提取培养过程中无需加入动物血清，制备过程无需加抗生素，原代分离无需过滤，两种培养方式同期进行，不仅提高了成功率且能在较短的时间得到大量稳定的细胞。本方法原代提取消化时间短，避免了I型胶原酶和分散酶长时间消化对细胞的影响，同时避免原代消化后细胞过滤后细胞数的损失。整个培养周期短，能高效、稳定的获得脐带间充质干细胞。

主权项

1.一种人脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 ：/n（1）采集：选取来自于医院正常足月的分娩的脐带，经与产妇及其家属签署知情同意书，胎儿娩出后，常规断脐，用碘伏纱布自脐带断端向胎盘断端快速擦拭，消毒2遍并清除血液羊水胎粪，并用含有生理盐水的纱布擦拭1遍去除碘伏，从断口处将脐血放尽并用无菌纱布擦拭除尽脐血；用止血钳夹住脐带的头端和尾端，然后在靠近止血钳处用无菌丝线结扎；把结扎好的脐带放入装有100ml采集液的采样瓶中，4-16℃，24小时内送达实验室操作；并采集母亲外周血5ml进行艾滋、梅毒、乙肝、丙肝、巨细胞病毒检测；/n（2）消毒、清洗：将脐带从采样瓶中取出，放至含有75%酒精的培养皿中，漂洗浸泡1min；将脐带从酒精中取出，放至新的培养皿，加入生理盐水漂洗去除残留的酒精；用剪刀去除两端结扎线，将脐带剪成3-4cm长的小段，用镊子去除每段脐带外表面血和挤出血管内的血，再将脐带转移到新的含有生理盐水的培养皿中，重复该过程直至清除淤血；/n（3）分离：在新的含有生理盐水的培养皿中，将脐带内端剪个切口，沿切口撕开，平铺脐带，将静脉血管和动脉血管剖离，用镊子撕取华通胶，放至装有生理盐水的离心管中备用；/n（4）漂洗、剪碎：准备2个6寸方盒，把离心管的华通胶移至6寸方盒用生理盐水漂洗后移至另一个6寸方盒，反复漂洗7遍，将清洗好的脐带华通胶捋干后转移到50ml离心管中用无菌剪刀剪至1.5-2.5mm