[发明专利]一种检测花青素诱导大鼠胰岛β细胞自噬效果的方法有效
| 申请号： | 201910885918.1 | 申请日： | 2019-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN110551791B | 公开（公告）日： | 2023-04-25 |
| 发明（设计）人： | 赖灯妮;邓放明 | 申请（专利权）人： | 湖南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02 |
| 代理公司： | 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 周新楣 |
| 地址： | 410128 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明属于运用细胞生物学检测技术领域，公开了一种检测花青素诱导大鼠胰岛β细胞自噬效果的方法，包括花青素溶液制备、大鼠胰岛β细胞的培养、花青素对大鼠胰岛β细胞毒性浓度范围筛查、流式细胞技术构建高糖大鼠胰岛β细胞凋亡模型、活性氧自由基水平实验和蛋白印迹方法验证高糖大鼠胰岛β细胞凋亡模型、细胞免疫荧光法检测花青素诱导大鼠胰岛β细胞产生自噬体效果、建立RFP‑GFP‑RIN稳定细胞株检测花青素诱导大鼠胰岛β细胞产生自噬流效果、结合花青素诱导大鼠胰岛β细胞产生自噬体和自噬流效果判断。本发明为花青素诱导大鼠胰岛β细胞自噬效果建立高通量筛选方法，并为花青素诱导大鼠胰岛β细胞自噬作用预防糖尿病提供理论依据。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 花青素 诱导 大鼠 胰岛 细胞 效果 方法 | ||
【主权项】：
1.一种检测花青素诱导大鼠胰岛β细胞自噬效果的方法，其特征在于，所述检测花青素诱导大鼠胰岛β细胞自噬效果的方法包括以下步骤：/n步骤一，将芍药素、天竺葵素、锦葵素、矢车菊素、飞燕草素以及矮牵牛素六种花青素分别溶于二甲基亚砜，配置为400mM储备浓度，于-20℃避光保存；/n步骤二，用含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液在37℃，5％二氧化碳的培养箱中培养大鼠胰岛β细胞；/n步骤三，花青素对大鼠胰岛β细胞毒性浓度范围的筛查；/n步骤四，利用流式细胞技术构建高糖大鼠胰岛β细胞凋亡模型；/n步骤五，活性氧自由基ROS水平实验验证高糖大鼠胰岛β细胞凋亡模型；/n步骤六，细胞凋亡蛋白表达水平验证高糖大鼠胰岛β细胞凋亡模型；/n步骤七，利用细胞免疫荧光法检测花青素诱导大鼠胰岛β细胞产生自噬体效果；/n步骤八，建立RFP-GFP-RIN稳定细胞株：包括慢病毒载体构建、慢病毒的包装制备、稳定细胞株的筛选；/n步骤九，利用细胞免疫荧光法检测花青素诱导大鼠胰岛β细胞产生自噬流效果；/n步骤十，结合花青素诱导大鼠胰岛β细胞产生的自噬体和自噬流效果进行判断。/n
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