[发明专利]精细调控酿酒酵母ERG7表达的重组菌及构建方法在审
| 申请号： | 201910889433.X | 申请日： | 2019-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN110628805A | 公开（公告）日： | 2019-12-31 |
| 发明（设计）人： | 卢文玉;赵方龙;南伟华;张传波 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N1/19;C12P33/00;C12R1/865 |
| 代理公司： | 12201 天津市北洋有限责任专利代理事务所 | 代理人： | 曹玉平 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种精细调控酿酒酵母ERG7表达的重组菌及构建方法，构建步骤：(1)构建TetR基因表达盒ACS1p‑TetR‑Cyc1t，并转入酿酒酵母；(2)将TetO序列插入酿酒酵母ERG7p启动子的从起始密码子算起‑78bp处得到酿酒酵母ERG7p启动子突变体ERG7Cp；(3)将ERG7Cp替换步骤(1)获得的酿酒酵母中的内源ERG7p启动子，得到精细调控酿酒酵母ERG7表达的重组菌。本申请利用四环素阻遏蛋白TetR和TetO序列调控元件实现对ERG7表达的精细控制，本发明构建的精细调控酿酒酵母ERG7表达的重组菌能在不同程度上抑制ERG7基因的表达，提高工程酿酒酵母原人参二醇的产量。 | ||
| 搜索关键词： | 酿酒酵母 构建 精细调控 重组菌 启动子 基因表达盒 起始密码子 启动子突变 四环素阻遏 原人参二醇 调控元件 内源 替换 蛋白 精细 转入 基因 申请 | ||
【主权项】：
1.一种精细调控酿酒酵母ERG7表达的重组菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：/n(1)构建TetR基因表达盒ACS1p-TetR-Cyc1t，并转化进入酿酒酵母W3a-HU；所述TetR基因的核苷酸序列用SEQ ID NO.1所示；/n(2)将TetO序列利用融合PCR的方法插入酿酒酵母ERG7p启动子的从起始密码子算起-78bp处得到酿酒酵母ERG7p启动子突变体ERG7Cp；所述TetO序列如SEQ ID NO.38所示；/n(3)将酿酒酵母ERG7p启动子突变体ERG7Cp替换步骤(1)获得的酿酒酵母中的内源ERG7p启动子，得到精细调控酿酒酵母ERG7表达的重组菌W3a-ERG7C。/n
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