[发明专利]小麦胚根原生质体悬浮液的制备方法在审
| 申请号： | 201910893050.X | 申请日： | 2019-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN110628693A | 公开（公告）日： | 2019-12-31 |
| 发明（设计）人： | 高利;杜真真;张菡;陈万权;刘太国 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 11129 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司 | 代理人： | 吴泳历 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及小麦原生质体的制备，具体涉及一种小麦胚根原生质体悬浮液的制备方法，包括如下步骤：将预处理液放置于冰上预冷，然后迅速切下小麦胚根的根尖，将根尖放入预处理液中，冰上预处理1小时；将预处理好的根尖放入酶解液中，然后在23℃避光振荡酶解2h；酶解后的溶液用300目细胞筛过滤两次，100‑300g，4℃离心5‑10min；小心去除上清，然后加入清洗液清洗细胞，100‑300g，4℃离心5‑10min；小心去除上清，然后用8％g/ml的甘露醇溶液重悬细胞，即得原生质体悬浮液。每克小麦胚根可获得8.25×10 | ||
| 搜索关键词： | 原生质体 根尖 胚根 预处理液 悬浮液 小麦 放入 酶解 去除 制备 预处理 小麦原生质体 甘露醇溶液 细胞 细胞活力 预处理好 酶解液 清洗液 细胞筛 振荡 避光 切下 预冷 重悬 过滤 清洗 | ||
【主权项】：
1.小麦胚根原生质体悬浮液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)将预处理液放置于冰上预冷，然后迅速切下小麦胚根的根尖，将根尖放入预处理液中，冰上预处理1小时；/n(2)将预处理好的根尖放入酶解液中，然后在23℃避光振荡酶解2h；/n(3)酶解后的溶液用300目细胞筛过滤两次，100-300g，4℃离心5-10min；/n(4)小心去除上清，然后加入清洗液清洗细胞，100-300g，4℃离心5-10min；/n(5)小心去除上清，然后用8％g/ml的甘露醇溶液重悬细胞，即得原生质体悬浮液；/n所述预处理液含有MES，KCL，MgCl
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