[发明专利]疏水蛋白-荧光蛋白融合蛋白及其构建与应用在审
| 申请号： | 201910895363.9 | 申请日： | 2019-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN110669140A | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 王泽方;张铧月;杨海涛 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/70;C12Q1/56 |
| 代理公司： | 12201 天津市北洋有限责任专利代理事务所 | 代理人： | 琪琛 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种疏水蛋白‑荧光蛋白融合蛋白及其构建与应用，其构建为：(1)化学合成改良过的疏水蛋白mHGFI、荧光蛋白smURFP及HO‑1的核苷酸序列；(2)将荧光蛋白基因smURFP的核苷酸序列与HO‑1的核苷酸序列连接；再将疏水蛋白基因mHGFI的核苷酸序列和荧光蛋白基因smURFP与HO‑1基因的核苷酸序列连接得到融合序列；(3)将融合序列连接到大肠杆菌表达载体上，得到重组表达载体；(4)将重组表达载体转入宿主大肠杆菌中，得到重组大肠杆菌；(5)破菌后，通过Ni亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层蛋白纯化方法得到疏水蛋白‑荧光蛋白融合蛋白。本发明对从大肠杆菌中纯化出的融合蛋白进行凝血酶检测，与其他检测方法相比具有生产成本低、生产效率高、操作简便、反应迅速、检测特异性与灵敏度高的优势。 | ||
| 搜索关键词： | 疏水蛋白 核苷酸序列 融合蛋白 荧光蛋白 核苷酸序列连接 荧光蛋白基因 重组表达载体 大肠杆菌 构建 宿主 大肠杆菌表达 离子交换层析 重组大肠杆菌 凝血酶检测 生产成本低 蛋白纯化 化学合成 凝胶过滤 生产效率 序列连接 灵敏度 基因 融合 检测 破菌 改良 转入 应用 | ||
【主权项】：
1.一种疏水蛋白-荧光蛋白融合蛋白的构建方法，其特征是包括如下步骤：/n(1)化学合成SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3所示的改良过的疏水蛋白mHGFI、荧光蛋白smURFP及HO-1的核苷酸序列；/n(2)利用OverlapPCR，以RBS序列为linker 1将荧光蛋白基因smURFP的核苷酸序列与HO-1的核苷酸序列连接；再以凝血酶酶切位点为linker 2将疏水蛋白基因mHGFI的核苷酸序列和荧光蛋白基因smURFP与HO-1基因的核苷酸序列连接得到融合序列；/n(3)将融合序列连接到大肠杆菌表达载体上，得到重组表达载体；/n(4)将重组表达载体转入宿主大肠杆菌中，得到表达疏水蛋白-荧光蛋白融合蛋白的重组大肠杆菌；/n(5)破菌后，通过Ni亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层一系列蛋白纯化方法得到应用于凝血酶检测的疏水蛋白-荧光蛋白融合蛋白。/n
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