[发明专利]一种体外催化ω-氨基酸生产二元羧酸的方法有效
| 申请号： | 201910898014.2 | 申请日： | 2019-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN110577973B | 公开（公告）日： | 2022-06-14 |
| 发明（设计）人： | 高超;严金鑫;马翠卿;许平 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12P7/46 | 分类号： | C12P7/46;C12P7/44 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 李健康 |
| 地址： | 250100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种体外催化ω‑氨基酸生产二元羧酸的方法，是以ω‑氨基酸为底物，加入ω‑氨基酸氧化酶Am‑AOX，黄嘌呤氧化酶和过氧化氢酶，构建多酶反应体系，通过体外多酶高效催化ω‑氨基酸生产一系列二元羧酸，如琥珀酸、戊二酸和己二酸。本发明构建的体外催化体系中只底物和3种酶，不需外源添加任何辅因子和辅助底物，并且所用酶的数量也少于天然合成途径，生产成本低、操作简便、污染低，产物得率高、分离方便，具有良好的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 体外 催化 氨基酸 生产 二元 羧酸 方法 | ||
【主权项】：
1.一种体外催化ω-氨基酸生产二元羧酸的方法，步骤是：/n(1)以ω-氨基酸为底物，加入ω-氨基酸氧化酶Am-AOX(E.C.1.4.3.6)，黄嘌呤氧化酶XOD(E.C.1.1.3.22)和过氧化氢酶CAT(E.C.1.11.1.6)，建立多酶反应体系，进行纯酶催化反应，得到含二元羧酸的转化液；/n(2)将所得的转化液加热使蛋白质变性沉淀，离心去除蛋白质，吸取上清稀释到适于测试的倍数后，用高效液相色谱仪分别测定反应体系中底物和产物的浓度，然后分离、纯化产物得到二元羧酸；/n其特征在于：/n步骤(1)所述底物ω-氨基酸选4-氨基丁酸、5-氨基戊酸或6-氨基己酸；所述ω-氨基酸氧化酶Am-AOX(E.C.1.4.3.6)来源于马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)DMKU3-1042，其因编号为AP012218.1，优化后的ω-氨基酸氧化酶基因核苷酸长度为2034个碱基，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述多酶反应体系中除底物和酶外还含有缓冲液和二价铜离子；所述酶催化反应条件是在37±1℃、pH 7.4±0.2的条件下，水浴摇床150±10转/分钟振荡反应3～30小时；/n步骤(2)所述加热的条件是102±1℃煮沸15±2分钟，所述去除蛋白质的离心条件是：14,680±500转/分离心10～15分钟，所述二元羧酸是琥珀酸、戊二酸或己二酸。/n
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