[发明专利]基于荧光染色的通用型病原微生物快速磁分离鉴别方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201910906981.9 | 申请日： | 2019-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN110596383A | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 农高惠;何林声 | 申请（专利权）人： | 珠海市德灏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;G01N33/543;G01N33/553;G01N33/58 |
| 代理公司： | 50241 重庆双马智翔专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 顾晓玲 |
| 地址： | 519060 广东省珠海市南屏科*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于荧光染色的通用型病原微生物快速磁分离鉴别方法：(1)制备通用桥连磁珠：a)制备磁珠‑链霉亲和素交联物；b)制备生物素‑Ab2交联物；c)制成通用桥连磁珠：将磁珠‑链霉亲和素交联物与生物素‑Ab2交联物混合孵育，制得通用桥连磁珠；(2)制备特异捕捉磁珠：将通用桥连磁珠与待测病原微生物的鼠源性Ab1混合，即得；(3)将待测样品与特异捕捉磁珠混合、孵育，磁分离洗涤，得到免疫磁珠分离物；(4)加入脱磁液孵育，磁分离，取上清涂片，加细菌染液或真菌染液，检测观察菌体着色状况。还公开了一种试剂盒，包括前述的特异捕捉磁珠、脱磁液、细菌染液和\或真菌染液。能够对样本中多种病原同步。 | ||
| 搜索关键词： | 磁珠 交联物 桥连 染液 病原微生物 制备 通用 链霉亲和素 捕捉 磁分离 真菌 脱磁 细菌 免疫磁珠分离 病原 磁分离洗涤 待测样品 混合孵育 荧光染色 制备生物 种试剂盒 生物素 鼠源性 通用型 液孵育 孵育 菌体 涂片 着色 样本 鉴别 检测 观察 | ||
【主权项】：
1.一种基于荧光染色的通用型病原微生物快速磁分离鉴别方法，其特征在于：包括如下步骤：/n(1)制备通用桥连磁珠：/na)制备磁珠-链霉亲和素交联物：取粒径为10～50nm的羧基磁珠，活化后与链霉亲和素结合，并封闭残余活性基团；/nb)制备生物素-Ab2交联物：取生物素进行活化，再与Ab2偶联；或者，用商品化的水溶性生物素N-羟基琥珀酰亚胺酯与Ab2直接偶联；/nc)制成通用桥连磁珠：将磁珠-链霉亲和素交联物与生物素-Ab2交联物混合孵育，制得通用桥连磁珠，洗涤去除游离的Ab2；/n(2)制备特异捕捉磁珠：将前面制备得到的通用桥连磁珠与待测病原微生物的Ab1混合，即可获得特异捕捉磁珠，洗涤去除游离Ab1；/n(3)将待测样品与特异捕捉磁珠混合、孵育，磁分离洗涤，得到免疫磁珠分离物；/n(4)在得到的免疫磁珠分离物中加入脱磁液孵育，磁分离，取上清涂片，加细菌染液或真菌染液，观察菌体着色状况；所述脱磁液为采用PB溶液溶解二硫苏糖醇的溶液，所述细菌染液为吖啶橙溶液或羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯溶液，所述真菌染液为荧光增白剂28溶液。/n
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