[发明专利]一种利用Real-time PCR技术检测单一菌株活菌数的方法在审
| 申请号： | 201910925295.6 | 申请日： | 2019-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN110499360A | 公开（公告）日： | 2019-11-26 |
| 发明（设计）人： | 印伯星;周炜;姜毓君;杨仁琴;吴慧;徐广新;杨忠良;王锦荣;吴长清;蒋丽娜 | 申请（专利权）人： | 扬州市扬大康源乳业有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/689;C12Q1/06;C12R1/01;C12R1/23 |
| 代理公司： | 23211 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 | 代理人： | 邓宇<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 225000 江苏省扬州*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种利用Real‑time PCR技术检测单一菌株活菌数的方法，属于生物技术领域。为解决目前检测活菌数耗时长的问题，本发明提供了一种利用Real‑time PCR技术检测单一菌株活菌数的方法，包括如下步骤：(1)制备待测菌株菌液标准品(2)绘制待测菌株的生长曲线(3)绘制待测菌株CT值曲线(4)获得待测菌株标准曲线公式(5)取待测菌液提取RNA，反转录，进行Real‑time PCR，获得CT值，将CT值带入上述步骤(4)中，获得待测菌液活菌数。利用上述方法能够替代传统耗时费力的基于培养的活菌数检测方法，快速的对工业用菌进行活菌数检测，为活菌数检测技术提供了新的思路和理论支持。 | ||
| 搜索关键词： | 待测菌株 活菌数 活菌数检测 菌液 单一菌株 检测 耗时 绘制 标准曲线公式 生物技术领域 理论支持 生长曲线 提取RNA 标准品 反转录 工业用 制备 费力 替代 | ||
【主权项】：
1.一种利用Real-time PCR技术检测单一菌株活菌数的方法，其特征在于，按照如下步骤进行：/n(1)待测菌株菌液标准品的制备：将待测菌株的单菌落接种在液体培养基上进行培养；/n(2)待测菌株生长曲线的绘制：在上述步骤(1)的菌液培养至不同时间点，取菌液样品，利用平板涂布法，计算活菌数，以培养时间点为横坐标，以菌株数对数值为纵坐标，绘制菌株生长曲线；/n(3)待测菌株CT值曲线的绘制：在上述步骤(1)的菌液培养至不同时间点，每次取相同体积的菌液样品，进行RNA的提取，反转录，利用菌株特异性的引物进行Real-time PCR，记录CT值，以培养时间点为横坐标，以CT值为纵坐标，绘制CT值曲线；/n(4)待测菌株标准曲线公式的获得：从上述步骤(2)所获得的生长曲线与步骤(3)所获得的CT值曲线上，选择相同的时间点，找出对应的菌株数及CT值，以CT值为横坐标，菌株数为纵坐标，绘制标准曲线，并获得标准曲线公式；/n(5)取待测菌液提取RNA，反转录，利用上述步骤(3)所述引物进行Real-time PCR，获得CT值，将CT值带入上述步骤(4)获得的标准曲线公式中，获得待测菌液活菌数。/n
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