[发明专利]一种快速鉴别番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒的方法

摘要

本发明提供一种快速鉴别番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒的方法，属植物保护领域。根据番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒核苷酸序列设计三条引物，[A]TYTO_R，[B]TY_F，[C]To_R，其中A/C组合检测番茄褪绿病毒，A/B组合检测番茄黄化曲叶病毒。样品提取总RNA后，只需一次RT‑PCR，即可检测番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒两种病毒，实现了两种病毒的鉴别。由于番茄黄化曲叶病毒是一种DNA病毒，番茄褪绿病毒是一种RNA病毒，因此传统的检测方法往往需要分别提取DNA和RNA进行检测，该方法仅需提取样品RNA，即可实现两种病毒的同步检测，大大减少了成本，节约了时间，是一种特异、灵敏、经济而又方便的检测方法。

主权项

1.一种快速鉴别番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒的方法，包括以下步骤：/n(1)引物设计：/n①根据NCBI上已报道的番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒核苷酸序列进行序列比对，结果显示，TYLCV与ToCV的RNA2区段之间存在一个小的保守基序，位于C3蛋白的3′末端，基于该基序的序列设计简并引物TYTO_R，基于ToCV(To_F)的CPm和TYLCV(TY_F)的C3的核苷酸序列分别设计两个正向引物，引物序列如下：/nTYTO_R：5′-AAT WCA TRR TCA ACT GCT CT-3′/nTo_F：5′-GGT TCA CAG ACA TCA TCA AAC C-3′/nTY_F：5′-ATG GAT TCA CGC ACA GGG-3′/n②引物配对及扩增目的核酸条带的大小如下：/n