[发明专利]以突变的筛选剂抗性基因为报告体系的C·T碱基替换的细胞富集技术及其应用有效
| 申请号： | 201910939081.4 | 申请日： | 2019-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN110669794B | 公开（公告）日： | 2021-07-16 |
| 发明（设计）人： | 杨进孝;杨永星;赵思;李璐;袁爽 | 申请（专利权）人： | 北京市农林科学院 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100097 北京市海淀区曙*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了以突变的筛选剂抗性基因为报告体系的C·T碱基替换的细胞富集技术及其应用。所述细胞富集技术包括如下试剂：sgRNA、C·T碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因；sgRNA由靶向目标基因靶点序列的tRNA‑sgRNA和靶向功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的tRNA‑sgRNA组成；功能丧失的筛选剂抗性基因为将筛选剂抗性基因进行无功能突变后得到的序列；C·T碱基替换系统可通过对含有所述突变位点的靶序列进行C·T碱基替换使功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复。本发明实现了细胞水平上C·T碱基替换细胞富集，大大提高C·T碱基替换效率。 | ||
| 搜索关键词： | 突变 筛选 抗性 基因 报告 体系 碱基 替换 细胞 富集 技术 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.成套试剂，其包括sgRNA或与所述sgRNA相关的生物材料、C·T碱基替换系统和功能丧失的筛选剂抗性基因或与所述功能丧失的筛选剂抗性基因相关的生物材料；/n所述sgRNA由靶向目标基因靶点序列的sgRNA和靶向所述功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列的sgRNA组成；/n所述sgRNA结构如下：所述靶点序列转录的RNA-sgRNA骨架；/n所述C·T碱基替换系统包括Cas9核酸酶或与所述Cas9核酸酶相关的生物材料和胞嘧啶脱氨酶或与所述胞嘧啶脱氨酶相关的生物材料；/n所述功能丧失的筛选剂抗性基因为将筛选剂抗性基因进行无功能突变后得到的序列；/n所述功能丧失的筛选剂抗性基因靶点序列为含有所述突变位点的靶点序列；/n所述C·T碱基替换系统在靶向所述含有所述突变位点的靶点序列的sgRNA的向导下，可通过对所述突变位点进行C·T碱基替换使所述功能丧失的筛选剂抗性基因功能恢复；/n所述sgRNA骨架为S1)或S2)或S3)：/nS1)将序列1第571-646位中的T替换为U得到的RNA分子；/nS2)将S1)所示的RNA分子经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的RNA分子；/nS3)与S1)或S2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性且具有相同功能的RNA分子。/n
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