[发明专利]一种诱导粉葛丛生芽的方法

摘要

本发明公开了一种诱导粉葛丛生芽的方法，涉及药用植物生物技术领域，包括：取粉葛藤于冬季扦插于温室中，来年的3~4月份取新发的嫩枝作为外植体；外植体在最适条件下消毒后，接种于启动培养基，诱导出无菌新芽后转入丛生芽诱导培养基中，获得丛生芽；其中所述的启动培养基中含有浓度为0.1~2.0 mg/L的NAA以及浓度为0.1~0.9 mg/L的6‑BA；其中所述的丛生芽诱导培养基中含有浓度为0.5~1.5 mg/L的TDZ以及0.1~1.0 mg/L的NAA。本发明特别优化调整粉葛丛生芽诱导培养基的组分及浓度配比，提高粉葛丛生芽的诱导率及增殖率，该方法具有培养简单、增殖系数高、再生周期短等优点。

主权项

1.一种诱导粉葛丛生芽的方法，包括外植体材料的获取、灭菌条件的筛选、启动培养条件探索、丛生芽诱导条件探索，其特征在于：包括以下步骤：/n（1）外植体获取：取粉葛藤于冬季扦插于温室中，定期浇水，来年的3~4月份，优选健壮的植株，待新长出的嫩枝带有4~5个节的时候，剪下作为外植体；/n（2）灭菌条件筛选：将健壮的嫩枝放入洗洁精和84消毒液混合溶液中浸泡10 min，然后用软毛刷蘸取洗洁精水刷洗表面，特别是茎的分支处需特别清洗，之后用自来水清洗干净，再用纯水清洗一次，装入无菌瓶中；将洗好的外植体置于超净工作台上，用75%乙醇溶液浸泡30 s，无菌水清洗2次后，用0.1%升汞溶液或2%次氯酸钠溶液灭菌8~10 min，加入表面活性剂吐温80，用无菌水清洗5次；/n（3）启动培养条件探索：将灭菌处理后的粉葛枝条切成1.5cm左右的带节茎段，多余部分去除，将切好的茎段接种到启动培养基中；所述启动培养基包括1/2MS、MS、B5、N6、KC培养基，同时含有浓度为0.1~2.0 mg/L的6-BA、浓度为0.1~0.9 mg/L的NAA以及含有蔗糖30 g/L、琼脂4 g/L、活性炭0.2 g/L，经过28 d的培养后获得无菌新芽；/n（4）丛生芽诱导条件探索：将启动培养阶段获得的无菌嫩芽转接到丛生芽诱导培养基中，所述的丛生芽诱导培养基包括MS、1/2MS、1/4MS、改良MS培养基，同时含有浓度为0.1~1.5 mg/L的TDZ、浓度为0.05~1.0 mg/L的NAA、浓度为0.5 mg/L的6-BA、KT、ZT细胞分裂素、浓度为0.05~0.1 mg/L的IBA、不同浓度的水解酪蛋白、水解乳蛋白、牛肉蛋白胨各有机添加物以及含有蔗糖30 g/L、琼脂4 g/L、活性炭0.2 g/L，经过28 d的培养后获得丛生芽。/n