[发明专利]一种落羽杉根，茎，叶原生质体分离、纯化及瞬时高效转化的方法在审
| 申请号： | 201910948163.5 | 申请日： | 2019-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN110669718A | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 华建峰;宣磊;杨颖;郭金博;裴笑笑;王芝权;於朝广;殷云龙 | 申请（专利权）人： | 江苏省中国科学院植物研究所 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;C12N15/82 |
| 代理公司： | 32274 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 210042 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种落羽杉根，茎，叶原生质体分离、纯化及瞬时高效转化方法，包括以下步骤：1)选择生长出1‑3轮叶片的落羽杉幼苗，避光培养24h；先用75％酒精清洗1遍，再用去离子水清洗3遍，然后刀片分离落羽杉幼苗的叶片，茎段以及根部；2)使用纤维素酶和果胶酶将落羽杉根，茎，叶酶解成原生质体，并对所得到的原生质体进行分离、纯化和预处理；3)以不同组织原生质体为受体，利用PEG介导转化法将含有外源基因的瞬时表达载体转入原生质体中，经培养，使外源基因在原生质体中表达。该方法操作简单易行，可以获得大量、完整、纯净的落羽杉根，茎，叶原生质体，并且转化效率均高达50％以上，为落羽杉基因瞬时表达检测，原生质体融合等提供技术依据。 | ||
| 搜索关键词： | 原生质体 叶原生质体 瞬时表达 外源基因 幼苗 预处理 原生质体融合 避光培养 高效转化 酒精清洗 去离子水 纤维素酶 选择生长 转化效率 果胶酶 轮叶片 刀片 介导 茎段 酶解 叶片 清洗 转入 基因 检测 转化 | ||
【主权项】：
1.一种落羽杉根，茎，叶原生质体分离、纯化及瞬时高效转化的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)选择生长出1-3轮叶片的落羽杉幼苗，避光培养24h；先用75％酒精清洗1遍，再用去离子水清洗3遍，然后刀片分离落羽杉幼苗的叶片，茎段以及根部；/n2)使用含1-8％vol的纤维素酶和1-5％vol的果胶酶的组织酶液将落羽杉根，茎，叶酶解成原生质体，并对所得到的原生质体进行分离、纯化和预处理；/n3)以不同组织原生质体为受体，利用PEG介导转化法将含有外源基因的瞬时表达载体转入原生质体中，经培养，使外源基因在原生质体中表达。/n
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