[发明专利]一种三唑磷分子印迹静电纺丝层析试纸条的组建方法

摘要

本发明涉及一种三唑磷分子印迹静电纺丝层析试纸条的组建方法，结合静电纺丝、分子印迹及免疫层析试纸检测技术，用静电纺丝法在NC膜上制备分子印迹T线(检测限)，羊抗小鼠IgG作为C线(质控线)，通过三唑磷半抗原偶联小鼠IgG偶联异硫氰酸荧光素(THBu‑IgG‑FITC)荧光探针与目标物三唑磷直接竞争分子印迹结合位点而产生的荧光变化，建立三唑磷分子印迹静电纺丝层析荧光检测技术。本发明提供的三唑磷吸附功能材料具有较高的选择性，采用虚拟模板可解决模板渗漏问题，可以代替生物抗体应用于免疫层析技术当中；该吸附功能材料具有较高的稳定性、较长的使用寿命和较强的抗恶劣环境的能力，克服了传统生物抗体制备周期长、易失活、成本高等缺点。

主权项

1.一种三唑磷分子印迹静电纺丝层析试纸条的组建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n层析试纸条的组建：首先，用样品垫处理液(0.5％吐温-0.02M pH 7.2PB缓冲液)对样品垫进行处理，然后干燥切条；接着，用划膜仪将二抗(羊抗小鼠IgG)以1μL/cm的流速划在NC膜上，37℃下干燥；随后对试纸条进行组装：因为T线需使用静电纺丝喷丝在铝箔上(NC膜不导电)，在C线下方5mm处将NC膜裁断，剪裁1mm宽的铝箔放置在裁断处，将上下两条NC膜及中间的铝箔粘贴在黑色荧光专用背板上，T线与C线间距5mm，然后在NC膜上下两侧依次粘贴吸水垫和样品垫，两垫与NC膜间均各覆盖1mm；/n静电纺丝法在NC膜上制备分子印迹T线：/n(1)静电纺丝溶液的配制，首先配制CA电纺基质溶液：称取一定量的CA粉末，加入到丙酮中配置成120mg/ml的CA-丙酮溶液，在50℃水浴下震荡溶解5h，直到CA彻底溶解；然后配制三唑酮分子印迹分散液：称取一定量的MIPs聚合物，加入到丙酮中配置成20mg/ml的MIPs分散液，常温下超声分散50min，直至MIPs聚合物彻底均匀分散在丙酮里；最后将CA电纺基质溶液与MIPs分散液混合：取1ml 120mg/ml的CA溶液，加入111μL 20mg/ml的MIPs溶液，再加入7μL 10％的吐温溶液，在50℃水浴中震荡120min，常温超声分散30min，得到均匀的三唑酮分子印迹静电纺丝液；/n(2)静电纺丝法在NC膜上制备分子印迹T线：采用实验室自制静电纺丝装置，包括自动微流泵、5ml注射器、高度调节架、喷针(22G)、接收板和高压电源，纺丝开始前，检查接地是否良好，记录温湿度，将配制好的分子印迹静电纺丝液吸入注射器中，喷针头与接收板间的接收距离调节至13cm，微流泵流速为12μL/min，高压电压为12.0kV，待出丝稳定后，用负极夹住组装好的试纸条T线铝箔的一端，放在接收板上(保证每次放置位置一致)，计时20min后取下，此时T线上便均匀的覆盖上分子印迹纳米纤维，而试纸条其他部位由于不导电而不会被覆盖，将纺好的试纸条放入烘箱中，37℃下干燥，随后用切条机切条，宽度为3.5mm，置于干燥器中室温保存，此时分子印迹试纸条便制备完成。/n