[发明专利]一种鸡源火鸡组织滴虫传代致弱株、其制备方法及用途

摘要

本发明涉及生物技术领域一种鸡源火鸡组织滴虫传代致弱株、其制备方法及用途，提供的鸡源火鸡组织滴虫传代人工致弱株A162具有良好的安全性和免疫原性，其由分离自鸡群的虫株经传代致弱、冻存再经虫株复苏，获得的候选活疫苗成本低，使用方便，使用后无药物残留，不产生耐药性，不会对环境造成污染，免疫原性好，使用安全，能有效抵抗105个强毒虫体的感染。相比火鸡来源虫株所制备的疫苗，该疫苗对鸡群的组织滴虫病的预防更为科学和可靠，有望成为药物控制鸡群组织滴虫病的替代手段，从而有效克服该病防治目前面临的巨大瓶颈和困境。

主权项

1.一种鸡源火鸡组织滴虫传代致弱株的制备方法，其特征在于包括如下步骤：/n（1）传代致弱：将从自然感染发生组织滴虫病的病死火鸡肝脏中分离获得的火鸡组织滴虫强毒株，在体外培养过程中每隔2-3天连续加以传代至162代人工致弱；/n（2）虫株冻存：培养液混匀后，每EP管内加入1ml含虫株的培养液，3000r/min离心5min；弃上清后每EP管内加入1ml M199培养基；混匀后转移到冻存管内，每根冻存管内加入二甲基亚砜100ul，混匀；旋紧盖子；放入已预冷的梯度降温盒中；立即放入﹣80℃超低温冰箱；12h后取出；放入冻存盒，放入液氮中；/n（3）虫株复苏：从液氮中快速取出所需复苏的虫株，放入40℃恒温水浴锅中轻轻摇晃至培养基融化；将冻存管内的培养基迅速转移至预热好的9ml正常传代用培养基中，放入40℃恒温培养箱中厌氧培养；36h后观察培养基中有无虫体生长，若有，进行下一次传代，若无，将其放回，过20-30min后再观察，选择有虫体生长的样品作为产品。/n