[发明专利]基于突变-编码文库的高通量筛选方法在审
| 申请号： | 201910964223.2 | 申请日： | 2019-10-11 |
| 公开（公告）号： | CN110616252A | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 胡欣;邵志敏;陈力 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属肿瘤医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 31287 上海容慧专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 于晓菁 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种基于突变‑编码文库的高通量筛选方法，包括将含有人全长基因突变的载体和含有特异性条形码的载体通过LR反应构建重组载体，之后转导入宿主细胞中，经过抗性筛选处理，抗药性实验，提取基因组，PCR纯化和测序处理的步骤；本发明针对功能性突变的高通量筛选这一空白领域，原创性地建立了突变编码高通量文库技术，能够准确、高效地挖掘功能性突变，从而为突变数据的精准解读提供有力的平台保障，对临床的诊断和发现靶向治疗的靶点具有重要指导意义。 | ||
| 搜索关键词： | 突变 高通量筛选 分子生物学技术 靶向治疗 编码文库 抗性筛选 全长基因 宿主细胞 突变编码 突变数据 文库技术 重组载体 抗药性 条形码 高通量 基因组 靶点 测序 构建 解读 诊断 挖掘 发现 | ||
【主权项】：
1.一种基于突变-编码文库的高通量筛选方法，包括如下步骤：/n(1)将目的的人全长基因编码区克隆到载体pENTR载体上，采用安捷伦公司二QuikChange II特异性位点突变试剂盒针对特定突变位点进行定点突变，获得含有人全长基因突变的载体；将特异性条形码克隆到逆转录载体上，获得含有特异性条形码的载体；将所得含有人全长基因突变的载体和所得含有特异性条形码的载体通过LR反应进行重组，构建出一系列重组载体；/n(2)将所得一系列重组载体等比例混合，转导入宿主细胞中，经过抗性筛选处理，得到含有突变基因的混合细胞文库；/n(3)对所得含有突变基因的混合细胞进行生长以及抗药性实验，之后提取基因组，并进行PCR纯化处理，然后对所得纯化产物进行测序处理。/n
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