[发明专利]一种基于幼叶的圆叶牛樟染色体核型分析方法在审
| 申请号： | 201910967017.7 | 申请日： | 2019-10-12 |
| 公开（公告）号： | CN110672389A | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 官锦燕;罗青文;文明富;谭嘉娜;罗剑飘;黄海英 | 申请（专利权）人： | 广州甘蔗糖业研究所湛江甘蔗研究中心 |
| 主分类号： | G01N1/28 | 分类号： | G01N1/28;G01N1/30;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 44228 广州市南锋专利事务所有限公司 | 代理人： | 李慧 |
| 地址： | 524000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于幼叶的圆叶牛樟染色体核型分析方法，包括以下步骤：取材：在晴朗的上午采集牛樟幼叶；预处理:幼叶置于饱和对二甲苯溶液中预处理，固定与保存；染色体标本制备：采用酶解去壁低渗法，经固定、前低渗、酶解、后低渗、涂片获得较佳的染色体标本；染色:吉姆萨染色；镜检；该方法简单易操作，适用于原位PCR、FISH操作的圆叶牛樟染色体核型分析方法，为牛樟细胞学研究提供技术基础。本发明首次报道了圆叶牛樟的染色体核型分析方法和核型，表明圆叶牛樟有24条染色体，核型公式为2n＝2x＝24＝22m+2sm，核型不对称系数55.451％，核型对称程度较高，这表明圆叶牛樟可能进化程度低，属于比较原始的古老的物种。为牛樟的起源，演化及遗传育种提供一定理论依据。 | ||
| 搜索关键词： | 圆叶 染色体核型 低渗 幼叶 预处理 酶解 染色体标本制备 对二甲苯溶液 吉姆萨染色 染色体标本 细胞学研究 技术基础 遗传育种 分析 原位PCR 不对称 染色 染色体 镜检 涂片 饱和 对称 进化 取材 采集 起源 物种 保存 | ||
【主权项】：
1.一种基于幼叶的圆叶牛樟染色体核型分析方法，其特征在于：所述的分析方法具体步骤如下：/nS1:取材/n在晴朗的上午9：00-11:00采集牛樟幼叶；/nS2：预处理/n把刚采集的叶片迅速投入饱和对二甲苯溶液中预处理；/nS3:固定与保存/n倒掉预处理液，叶片清水冲洗后转入卡诺固定液，在黑暗4℃环境下固定24h，移弃固定液，直接用来染色体制片；/nS4:染色体标本制备/n(1)前低渗:把步骤S3固定的幼叶置于蒸馏水中进行前低渗30min；/n(2)酶解:把步骤(1)的幼叶置于盛有5％纤维素酶和4％果胶酶混合液的1ml离心管中，并置于37℃的恒温水浴锅中酶解；/n(3)后低渗:吸取酶液，缓缓地沿着管壁加入蒸馏水，后低渗30min；/n(4)后固定:吸取蒸馏水，滴加临时配制的固定液：乙醇：冰醋酸＝3：1后，固定15min；/n(5)涂片：把玻片、临时配制的固定液均置于冰面上，取一张玻片，先滴3滴固定液，再夹取1片幼叶置于玻片上，用解剖针挑取边缘的分生组织，并迅速捣碎再均匀涂抹在载玻片上，再从一端滴加一滴固定液使细胞扩散，接着在火焰上迅速烘烤，自然风干；/nS5:染色/n将缓冲液与吉姆萨原液按比例制成工作液，再把干燥的制片置于吉姆萨染色液中染色10-20min，，清水冲洗干净，置烘箱37度烘干；/nS6:镜检/n用POTIKA正立显微镜观察，Optika Vision pro拍照系统拍照，在40X物镜下对单位视野面积内处于分裂中期的细胞进行计数，选择30个染色体分散且形态较好的细胞进行染色体数目统计，选取5个染色体形态清晰且无重叠的细胞用Photoshop图像软件进行核型分析。/n
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