[发明专利]一种具有辅助抗肿瘤作用的石莼寡糖复合物的制备方法

摘要

本发明公开了一种具有辅助抗肿瘤作用的石莼寡糖复合物的制备方法，其是从绿藻石莼中提取获得石莼多糖粉末，然后利用过氧化氢及抗坏血酸或异抗坏血酸氧化水解石莼多糖，经纯化后得到高纯度的石莼功能寡糖，再与同时制备的降解石莼活性多糖按比例调配成所述复合物。经动物药效学证实，所得复合物在KM小鼠体内对H22肝癌瘤具有显著的杀伤能力，且无明显副作用，是一种无毒性、副作用小、十分安全的生物活性物质，这不仅为石莼作为海洋药物资源的进一步利用提供了新的途径，也为治疗或预防肿瘤的药物开发提供了新的选择。

主权项

1.一种具有辅助抗肿瘤作用的石莼寡糖复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1）将石莼利用清水浸泡脱盐后干燥并粉碎，然后按20-30mL/g的量向所得石莼干粉中加入体积浓度为60%-80%的乙醇溶液，回流提取1-2小时，回流结束后烘干，得到干燥脱脂的石莼粉末；/n2）按30-40mL/g的量向步骤1）制得的石莼粉末中加入蒸馏水，并在60-70℃的萃取温度下以350-400W超声波辅助提取120分钟，而后于80-90℃热水中浸提2-3小时，提取结束后过滤，将滤渣按上述条件重复提取2-3次，合并滤液，4000-5000rpm离心10-20分钟，所得上清液在65-70℃下减压浓缩至原体积的1/10，再加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达80%，然后在4℃静置8-12小时，滤取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，减压干燥，得石莼粗多糖；/n3）将步骤2）制备得到的石莼粗多糖按体积比1:100-1:120完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.1%-0.2%的中性蛋白酶，于40℃下静置2-3小时后，于100℃煮沸20-30分钟，再于4000-5000rpm离心10-15分钟，除去沉淀，得到除去蛋白的粗制多糖溶液；/n4）将步骤3）所得粗制多糖溶液经HPD-826大孔吸附树脂填充柱除杂后，按35-50mL洗脱液加入1g活性炭吸附去除色素，再以60-80rpm摇床震荡1-2小时，而后以6000-8000rpm离心20-30分钟，收集上清液；/n5）利用截留分子量为8000D以上的透析袋透析去除步骤4）所得上清液中的小分子及色素，再将截留液减压浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥，粉碎，得到精制的石莼多糖粉末；/n6）将步骤5）所得的石莼多糖粉末按体积比1:80-1:100完全溶解于蒸馏水中，然后加入溶液重量0.05%的过氧化氢及溶液重量0.026%的抗坏血酸或异抗坏血酸，于65-75℃下反应3-4小时，并辅以100-200rpm的搅拌，得到石莼多糖降解液；/n7）取步骤6）所得的石莼多糖降解液，加入体积浓度为95%的乙醇使溶液中乙醇的体积浓度达75%，然后4℃静置8-12小时，再于4000-5000rpm离心10-15分钟，除去沉淀，收集上清液减压浓缩至原体积的1/5-1/4，得粗制石莼寡糖溶液；/n8）将步骤7）中所得粗制石莼寡糖溶液采用截留分子量为3000D的透析袋处理，收集透析液及截留液；/n9）将步骤8）所得透析液采用截留分子量为800D的透析袋处理，取截留液冷冻干燥，制得石莼活性寡糖；/n10）将步骤8）所得截留液冷冻干燥，制得降解的石莼活性多糖。/n11）将步骤9）所得的石莼活性多糖及步骤10）所得的石莼活性寡糖按照重量比1:2混合，得到所述复合物。/n