[发明专利]一种构建骨髓细胞Drp1基因特异性敲减小鼠模型的方法有效
| 申请号： | 201910975388.X | 申请日： | 2019-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN110684803B | 公开（公告）日： | 2021-08-27 |
| 发明（设计）人： | 于卫华;海春旭;闫文俊;王欣;李文丽;刘江正 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/90;C12N15/12;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京劲创知识产权代理事务所(普通合伙) 11589 | 代理人： | 杨金贤 |
| 地址： | 710032 陕西*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种构建骨髓细胞Drp1基因特异性敲减小鼠模型的方法，涉及生物技术领域，所述制备方法包括以下步骤：(1)Drp1‑shRNA慢病毒载体的构建；(2)骨髓细胞的慢病毒体外感染；(3)感染细胞植入小鼠建立模型。本发明率先采用内眦静脉注射方法构建骨髓细胞Drp1基因特异性敲减小鼠模型，并对移植的骨髓细胞数目和病毒感染条件进行了优化，具有快速建模、成功率高、特异性好和经济成本低的优势。不仅为研究Drp1基因免疫学功能提供了动物模型，也为其他骨髓特异性基因模式动物的制备提供了新的依据。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 构建 骨髓细胞 drp1 基因 特异性 减小 模型 方法 | ||
【主权项】：
1.一种构建骨髓细胞Drp1基因特异性敲减小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)Drp1-shRNA慢病毒载体的构建/n特异性敲减Drp1基因的shRNA的引物设计如下：/nDrp1正向引物如SEQ ID No.1所示，/nDrp1反向引物如SEQ ID No.2所示，/n通过退火，产生双链shRNA，扩增后回收，并与特异性酶切载体连接获得重组质粒，包装所述重组质粒，获得Drp1-shRNA慢病毒；/n(2)骨髓细胞的慢病毒体外感染/n取分离的小鼠骨髓细胞，加入Drp1-shRNA慢病毒瞬时转染，并加入10ug/ml聚凝胺和10mmol/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸，静置10min后，800g离心30min，弃上清，无菌PBS重悬细胞，得到Drp1-shRNA病毒感染的骨髓细胞；/n(3)感染细胞植入小鼠建立模型/n取小鼠，用C
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