[发明专利]一种从土壤中分离抗烟草花叶病毒细菌的方法在审
| 申请号： | 201910981804.7 | 申请日： | 2019-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN110628626A | 公开（公告）日： | 2019-12-31 |
| 发明（设计）人： | 张国基;张希兰;汤燕雯;赵甜 | 申请（专利权）人： | 佛山市金净创环保技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/02 | 分类号： | C12N1/02;C12Q1/18 |
| 代理公司： | 44463 佛山粤进知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 张敏 |
| 地址： | 528000 广东省佛山市南海区桂城街道*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种从土壤中分离抗烟草花叶病毒细菌的方法，包括以下步骤：(1)取1.0g土样，放入瓶内，加入无菌水，密封后震荡培养1‑3h；(2)将步骤(1)中震荡培养后的溶液静置20‑60min后，取上清液梯度稀释，混合均匀后每个浓度取80‑120μL分别均匀涂布于培养基的平板上；(3)将平板在25‑30℃恒温培养箱中培养15‑20h；(4)取出培养后的平板，从中选择细菌菌落分布均匀的平板，挑取单斑放至2‑5mL培养液中震荡培养10‑20h，形成菌液。本发明公开了从不同生境(浅海海泥和烟草根际土壤)采集的样品中分离对烟草花叶病毒病毒具有抑制作用的细菌，丰富抗病毒有益细菌的种类，并进一步简单测定抗病毒效果，为抗烟草花叶病毒细菌的利用奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 烟草花叶病毒 震荡培养 细菌 培养液 恒温培养箱 抗病毒效果 均匀涂布 取上清液 梯度稀释 细菌菌落 烟草根际 培养基 抗病毒 无菌水 土壤 浅海 单斑 放入 海泥 菌液 生境 土样 密封 取出 病毒 采集 | ||
【主权项】：
1.一种从土壤中分离抗烟草花叶病毒细菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)取1.0g土样，放入瓶内，加入无菌水，密封后震荡培养1-3h；/n(2)将所述步骤(1)中震荡培养后的溶液静置20-60min后，取上清液梯度稀释，混合均匀后每个浓度取80-120μL分别均匀涂布于培养基的平板上；/n(3)将平板在25-30℃恒温培养箱中培养15-20h；/n(4)取出培养后的平板，从中选择细菌菌落分布均匀的平板，挑取单斑放至2-5mL培养液中震荡培养10-20h，形成菌液；/n(5)取1mL菌液，离心8-12min，取上清液与等体积烟草花叶病毒接种液混合，室温静置15-30min形成混合液；/n(6)取烟草花叶病毒接种液与等体积磷酸盐缓冲溶液混合，室温静置15-30min形成对照混合液；/n(7)以三生烟为实验材料，在三生烟叶片上均匀撒布石英砂，以三生烟叶的主脉为界限，轻轻摩擦混合液于半片叶片；另外半片叶片摩擦对照混合液；/n(8)摩擦混合液和对照混合液15-30min后，用无菌水喷洒清洗叶片，室温条件下自然风干；/n(9)温室中隔离培养2-4d，然后计数叶片上枯斑的数目，实验数据进行单因素方差分析，进行差异显著行分析，按照以下公式统计抗病毒效果：/n
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