[发明专利]核苷酸序列构建的CRISPR重组质粒靶向编辑ISS序列的方法在审
| 申请号： | 201910985414.7 | 申请日： | 2019-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN110714008A | 公开（公告）日： | 2020-01-21 |
| 发明（设计）人： | 吴刘成;华益民;朱顺星;邵义祥;孙俊杰;刘春;王旭 | 申请（专利权）人： | 南通大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/63;C12N15/66;C12N15/90 |
| 代理公司： | 11427 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 徐思波 |
| 地址： | 226019 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种核苷酸序列构建的CRISPR重组质粒靶向编辑ISS序列的方法，步骤为：靶向设计sgRNAqingqin oligo序列，两端加BsmBI质粒酶切位点，构建重组质粒，转化，铺板，挑单克隆，提质粒，测序，序列比对，经鉴定，构建成功。本发明采用CRISPR case 9 sgRNAqingqin重组质粒，可以精准靶向编辑（包括删除、插入及突变）ISS序列，也可以达到使剪接沉默子ISS序列失去作用或作用减弱的效果，从而显著促进SMN2外显子7列入，而且该重组质粒可以在细胞内持续性表达发挥作用，一次性转染即可，是治疗相关遗传性疾病最有潜力的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 重组质粒 靶向 构建 剪接 构建重组质粒 核苷酸序列 遗传性疾病 铺板 靶向设计 序列比对 质粒酶切 沉默子 持续性 外显子 一次性 测序 提质 位点 转染 突变 删除 细胞 治疗 转化 成功 | ||
【主权项】：
1.一种核苷酸序列构建的CRISPR重组质粒靶向编辑ISS序列的方法，其特征在于，步骤为：靶向设计sgRNAqingqin oligo序列，两端加BsmBI质粒酶切位点，构建重组质粒，转化，铺板，挑单克隆，提质粒，测序，序列比对，经鉴定，构建成功。/n
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