[发明专利]一种体外提取并培养胚胎神经干细胞的方法及培养基的制备有效
| 申请号： | 201911015877.7 | 申请日： | 2019-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN110628706B | 公开（公告）日： | 2021-07-02 |
| 发明（设计）人： | 范筱;张英羽 | 申请（专利权）人： | 青岛市市立医院 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073;C12N5/0797 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 饶文君;蔡学俊 |
| 地址： | 266011 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种体外提取培养胚胎神经干细胞的方法，取出生24h内的新生鼠，脱颈处死后，浸入乙醇消毒，氯化钠溶液冲洗，用无菌剪刀于上颈椎和骶椎处剪断脊柱，取出脊柱干部；用宽嘴镊子将脊柱内的脊髓挤出，放入氯化钠溶液中，显微镜下剥离脊膜，将脊髓过滤后放入离心管中；加入胰蛋白酶边吹打边消化，加入DMEM/F12培养基中止消化，细胞滤网过滤后离心，收集细胞，加入胚胎神经干细胞完全培养基进行培养。胚胎神经干细胞完全培养基配方包括DMEM/F12、谷氨酰胺、赖氨酸、B‑27添加物、N2添加物、青霉素、链霉素、bFGF、EGF、胰岛素、小分子抑制剂CHIR99021。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 体外 提取 培养 胚胎 神经 干细胞 方法 培养基 制备 | ||
【主权项】：
1.一种体外提取培养胚胎神经干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n取出生24h内的新生鼠，脱颈处死后，迅速浸入75v/v%乙醇消毒，0.9w/v%氯化钠溶液冲洗，剥离皮肤，暴露脊柱，用无菌剪刀于上颈椎和骶椎处剪断脊柱，取出脊柱干部；用宽嘴镊子将脊柱内的脊髓挤出，放入0.9w/v%氯化钠溶液中，显微镜下剥离脊膜，将脊髓剪成1mm
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