[发明专利]一种乳制品Kappa-酪蛋白类型的检测方法及其应用

摘要

本发明公开了一种乳制品Kappa‑酪蛋白类型的检测方法，特别是牛乳中Kappa酪蛋白类型的检测方法，属于乳制品领域。本发明的检测方法，通过制备待测样品和标准品，利用反相高效液相色谱依次检测标准品和样品，采集色谱图，根据标准品中KCN‑A和KCN‑B的保留时间，确定样品中Kappa‑酪蛋白的类型和含量；洗脱程序为梯度洗脱，流动相A为体积比0.1%三氟乙酸水溶液、流动相B为体积比0.1%三氟乙酸乙腈溶液。该检测方法可准确分析检测牛奶的Kappa‑酪蛋白类型，省时省力；可根据检测结果区分不同变异体基因类型的奶牛，进而实现优化养殖及育种，同时可根据检测结果有针对性的分类开发高品质乳制品。

主权项

1.一种乳制品Kappa-酪蛋白类型的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1准备样品和标准品：/n101样品准备：如果是奶粉则加水配制成乳液，将乳液或牛乳则进行脱脂处理，得到样品待处理液；在样品待处理液中加入缓冲溶液一，静置，离心，混匀，室温静置孵育，所述缓冲溶液一使得Kappa-酪蛋白与其他物质分离；取中层液体，得到样品清液；在杨品清液中加入缓冲溶液二和还原剂；混匀，过滤，得到待上机检测的样品液；/n102标准品准备：取Kappa-酪蛋白标准品，加入缓冲溶液一，溶解均匀，室温静置孵育，定容，得到标准品清液；加入缓冲溶液二和还原剂；混匀，过滤，得到已知酪蛋白浓度的待上机标准液；/n所述缓冲溶液一是含有盐酸胍、双(2-羟基乙胺基) 三(羟甲基) 甲烷和磷酸氢二钠的混合水溶液；/n样品待处理液：缓冲溶液一的体积比为1:2-10；/n所述缓冲溶液二是盐酸胍水溶液；所述还原剂为二硫苏糖醇水溶液或β-巯基乙醇水溶液；/nS2色谱检测：/n采用反相高效液相色谱依次检测标准液和样品液，采集色谱图，确定标准品中Kappa-酪蛋白A和Kappa-酪蛋白B保留时间和峰面积，将样品色谱与标准品色谱进行对比分析，确定样品中Kappa-酪蛋白的类型并计算其含量；/n色谱参数如下：/n色谱柱：SB-C8 300A 4.6×250mm 5-Micron 或等效柱；/n采用梯度洗脱程序进行洗脱，流动相A：体积比0.1%的三氟乙酸-水溶液、流动相B：体积比0.1%的三氟乙酸乙腈溶液；/n洗脱程序：/n