[发明专利]一种腐乳微生物群落DNA的提取试剂和提取方法有效
| 申请号： | 201911022260.8 | 申请日： | 2019-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN110592076B | 公开（公告）日： | 2022-03-08 |
| 发明（设计）人： | 胡敏;谭贵良 | 申请（专利权）人： | 电子科技大学中山学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 郭炜绵 |
| 地址： | 528400 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种腐乳微生物群落DNA的提取试剂及提取方法，该提取试剂包括细胞分离液、细胞冲洗液、细胞裂解液、PCR抑制物质沉淀液和清洗液。本申请从腐乳样品大豆残渣含量高，有机酸、氨基酸丰度的特征出发，设计了腐乳微生物回收、细胞裂解、PCR反应物质去除及DNA高效回收过程。在去除PCR抑制物质方面，应用硫酸铵、盐酸胍和CTAB相结合的方法，同时去除多糖、多酚及干扰蛋白。从而获取高质量DNA用于后续的分子生物学实验。本方法可同时提取腐乳细菌及真菌的DNA，所提取的DNA成功用于16S rRNA及ITS基因的PCR反应及高通量测序，也成功应用于宏基因组测序及分析。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 腐乳 微生物 群落 dna 提取 试剂 方法 | ||
【主权项】：
1.一组提取腐乳微生物DNA的试剂，其特征在于包括细胞分离液、细胞冲洗液、细胞裂解液、PCR抑制物质沉淀液和清洗液；/n所述的细胞分离液含有10～20mM磷酸二氢钾，10～20mM磷酸氢二钠，100～200mM氯化钠，1～2mM氯化钾，pH值7～8；/n所述的细胞冲洗液含有100～200mM磷酸二氢钾，100～200mM磷酸氢二钠，0.05～0.10％吐温20，pH值7～8；/n所述的细胞裂解液含有0.5～1.0％SDS，0.5～1.0％聚乙二醇辛基苯基醚，100～200mMTris-HCl，0.5～1.0mM EDTA，50～100mM KCl，pH值7～8；/n所述的PCR抑制物质沉淀液含有100～200mM磷酸二氢钾，100～200mM磷酸氢二钠，50～100mM硫酸铵，200～500mM盐酸胍，1～2％CTAB，pH值7～8；/n所述的清洗液含有75～85％乙醇，100～200mM NaCl，10～20mM Tris，pH值7～8。/n
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