[发明专利]一种寡核苷酸库的均一化方法有效
| 申请号： | 201911087247.0 | 申请日： | 2019-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN110699428B | 公开（公告）日： | 2021-04-20 |
| 发明（设计）人： | 齐浩;郜艳敏 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 刘猛 |
| 地址： | 300354 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物技术领域，公开了一种寡核苷酸库的均一化方法。本发明可先将寡核苷酸库通过PCR的方式进行总量的放大，降低寡核苷酸合成成本；同时采用平均分子数加入等量的捕获探针，使各寡核苷酸分子数都趋于平均数，拉近各单链寡核苷酸的浓度，整个过程可以进行多次循环，达到理论上各寡核苷酸的绝对化均一；此外，配合磁珠吸附技术，可高效、简便的纯化寡核苷酸库，相比HLPC和PAGE纯化方法更加优异。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 寡核苷酸 均一 方法 | ||
【主权项】：
1.一种寡核苷酸库的均一化方法，其特征在于，包括：/n步骤1、将初始单链寡核苷酸库以及DNA标准品进行凝胶电泳，依据电泳结果，通过灰度分析DNA标准品与寡核苷酸库，计算出初始单链寡核苷酸库的平均分子数；或/n将初始双链寡核苷酸库采用正、反向引物对双链寡核苷酸库进行PCR扩增，其中正向或反向引物5’末端带有磷酸基团；PCR扩增后，lambda外切酶识别带有磷酸基团的一条链并进行降解，得到总量放大的单链寡核苷酸库；将所述总量放大的单链寡核苷酸库以及DNA标准品进行凝胶电泳，依据电泳结果，通过灰度分析DNA标准品与所述总量放大的单链寡核苷酸库，计算出所述总量放大的单链寡核苷酸库的平均分子数；/n步骤2、按平均分子数加入单链寡核苷酸库中每种单链寡核苷酸的捕获探针，经过杂交，高于平均分子数的单链寡核苷酸没有被捕获会处于游离状态，而低于平均分子数的单链寡核苷酸会全部被捕获，多余的捕获探针处于游离状态；捕获完成之后，经聚合酶聚合，然后将游离的单链寡核苷酸以及捕获探针经外切酶I降解，使各单链寡核苷酸分子数都趋于平均数，拉近各单链寡核苷酸的浓度，得到浓度相对均一的双链寡核苷酸文库；其中，所述捕获探针根据每种单链寡核苷酸序列设计，且5’末端带有磷酸基团；/n步骤3、重复步骤1至步骤2零次或一次以上。/n
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