[发明专利]一种赫氏埃希氏菌的微滴式数字PCR快速检测方法在审
| 申请号： | 201911103331.7 | 申请日： | 2019-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN110669856A | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 刘云国;扈晓杰;王芳芳;彭善丽;康大成 | 申请（专利权）人： | 临沂大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/10;C12Q1/686;C12R1/185 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 276000 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种赫氏埃希氏菌的微滴式数字PCR快速检测方法，首先提取待测样品增菌液的基因组DNA并稀释备用；再利用赫氏埃希氏菌基因组保守性DNA序列设计特异性引物和探针；然后使用该引物和探针对待测样品增菌液的基因组DNA进行微滴式数字PCR扩增和检测。经PCR扩增后，采用微滴分析仪逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光信号的微滴判读为0，最终根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例，计算出待检靶分子的浓度或拷贝数。微滴式数字PCR可以直接得出DNA分子的个数，能对样品中的赫氏埃希氏菌进行绝对定量。具有灵敏高、定量精确、检测的线性范围宽、特异性好、费用适中的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 微滴 数字PCR 基因组DNA 荧光信号 增菌液 判读 探针 检测 特异性引物 保守性DNA 泊松分布 待测样品 快速检测 序列设计 靶分子 分析仪 基因组 拷贝数 再利用 扩增 稀释 引物 备用 灵敏 | ||
【主权项】：
1.一种赫氏埃希氏菌的微滴式数字PCR快速检测方法，其特征在于，首先提取待测水产品样品增菌液的基因组DNA并稀释备用；再利用赫氏埃希氏菌基因组保守性DNA序列设计特异性引物和探针；然后使用该引物和探针对待测水产品样品增菌液的基因组DNA进行微滴式数字PCR扩增和检测，其中所述的赫氏埃希氏菌特异性引物为：E.herm-1：5’-CCCGGATGCCGTCACGCAGTT-3’；E.herm-2：5’-ATCTTCTGCGGCGAAGAGGTATCGC-3’；特异性探针为：E.herm-3：5’-FAM-ATGCGCGGGATCGGCGACCATGTGACCCG-3’。/n
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